进出口食品中耐热大肠菌群快速计数法-3mpetrifilm大肠菌群测试片.docVIP

《出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法 任务来源 根据国家出入境检验检疫总局2011年下达的标准编写任务通知(计划编号：2011B145)，由福建出入境检验检疫局主持中华人民共和国国家出入境检验检疫行业标准《出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测贝类，多指软体动物门中的瓣鳃纲（或双壳纲）动物，一般体外披有块贝壳，常见的有牡蛎、贻贝、蛤、蛏等。由于贝类生长位置较稳定，一旦遇到污染，很难回避；且贝类多属于滤食型生物，在进食食物的同时，也将水中的有毒有害物质吸入体内。随着近海沿岸水域人类活动的日益频繁，年贝类受到到大肠菌群、粪大肠菌群污染的事件时有报道。大肠菌群、粪大肠菌群作为常用的标菌，被广泛应用于各类水产品的检验。目前，系统内尚无专门针对贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测的标准方法。因此本制标项目将在现有的相关国家标准和检验检疫行业标准的基础上，参考国外相关检测方法，研究制定贝类（及其产品）适用的大肠菌群、粪大肠菌群检测方法，以适应日益增长的技术执法中对贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测的需要。“贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法”目前无相同的国家标准和行业标准，我国现行的国家标准“食品卫生微生物学检验 水产食品检验”（ GB/T 4789.20-2003）未规定粪大肠菌群检测方法，“鲜、冻动物性水产品卫生标准”（GB 2733-2005）、“出口活贝类检验规程”（SN/T 0375-1995）等相关国家行业标准也未就贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法进行规定。本制标项目将现有的相关国家标准和检验检疫行业标准的基础上，参考国外相关检测方法，结合多年来国家标准、行业标准实际应用情况，吸收新的检测技术或手段，研究制定新的贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法，并进行验证和编制。.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求进行编写。其中技术路线参照美国食品药品管理局（FDA）《细菌分析手册》第4章大肠杆菌和大肠菌群计数（2002年）（Bacteriological Analytical Manual，Chapter 4:Enumeration of Escherichia coli and the coliform bacteria,2002）。GB/T 4789.20 食品卫生微生物检验 水产食品检验GB 17378.7 海洋监测规范 第部分：　培养基制备指南　第部分：实验室培养基制备质量保证通则 　培养基制备指南　第部分：培养基性能测试实用指南 GB 4789.3 《食品微生物学检验 大肠菌群计数》、GB 4789.39 《食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数》以及GB 17378.27 《海洋监测规范 第部分：近海污染生态调查和生物监测制订适用贝类的大肠菌群、粪大肠菌群检测方法。P值 P0.05 从对两种人工污染样品三个接种水平两种取样量计数结果可以看出,两种方法所得结果经统计学处理，无显著差异，从检测结果来看，取样量为200g的检测数值大部分大于取样量为25g的检测数值，说明取样量大检出的菌量会相对多点，也可能与试验样本数不够多有关系。 5.1.2 相对准确性 5.1.2.1方法 2.1 实验菌株菌液制备 采用5.1.1.1制备的基质，分别称取四份各200g花蛤肉均质待用。添加菌液制备同5.1.1.2，将过夜培养的菌悬液，10倍递增稀释至所需浓度（本实验采用10-6、10-7、10-8、10-9四种稀释度），每个稀释度取1mL分别添加到四份200g花蛤肉中均质混匀，分成四组，按照贝类大肠菌群、粪大肠菌群检测法检测，同时用常用的3管法计数所添加菌液含菌量。 结果 表2 大肠菌群数量的检测结果 组别 贝类大肠菌群检测方法 所添加菌液含菌量 阳性反应管数 MPN （每克） 阳性反应管数 MPN （每克/毫升） 95%可信限 1g 0.1g 0.01g 1g 0.1g 0.01g 下限 上限 1 5 5 4 160 3 3 2 110 18 410 5 5 4 160 5 5 3 92 5 5 3 92 5 5 2 54 2 5 4 2 22 3 2 2 21 4 43 5 4 2 22 5 4 1 17 5 4 3 28 5 3 2 14 3 4 3 1 3.3 2 1 1 2 0.45 4.2 4 3 2 3.4 4 1 0 1.7 3 4 1 2.4 4 4 0 3.4 4 0 0 0 ＜0.2 0 0 0 ＜0.3 -- 0.95 0 0 0 ＜0.2 0 0 0 ＜0.2