萃取技术在生物分离中的应用1.docVIP

萃取技术在生物分离当中的应用的研究综述 【摘要】：本文就目前萃取技术在生物分离当中的应用作简要的综述，介绍了当前关于萃取技术的相关原理及类型特点以及各类萃取技术在生物分离当中的应用及发展等方面的研究进展。 【关键词】：萃取技术 ；生物分离 利用物质在互不相溶的两种溶剂中溶解度的不同而进行分离的方法称之为萃取。【1】在近几十年中，随着生命科学、生物工程、合成药学、环境科学、食品工程的迅速发展，分析对象不断增加，对复杂基体中的各组分的分离与检验成为突出问题。对样品的预处理方法，将导致定性、定量的错误、仪器寿命的缩短等严重后果。目前常用的传统的萃取方法有很多不足，如需大量试剂，试验成本过高，样品处理步骤复杂，浪费时间、人力、样品回收率、精密度不理想，且样品易损失等问题。随着问题的出现也相应出现解决问题的方法：固相萃取、固相微萃取、超临界萃取、微波萃取等新技术应运而生。 一、萃取技术的相关原理及类型 萃取法的萃取原理是以分配定律为基础的 （1）萃取法是利用液体混合物各组分在某有机溶剂中的溶解度的差异而实现分离的。 （2）在萃取中，被提取的溶液称为料液，其中欲提取的物质称为溶质，用以进行萃取的溶剂称为萃取剂。经接触分离后，大部分溶质转移到萃取剂中，得到的溶液称为萃取液，而被萃取出溶质的料液称为萃余液。 萃取技术的几种类型 （1）有机溶剂萃取 （2）双水相萃取 （3）超临界萃取 （4）微波萃取 （5）超声波萃取 （6）超高压萃取等 二、各萃取技术类型的介绍及在生物分离当中的应用 （1）有机溶剂萃取 ◆有机溶剂萃取所用的两相分别是水相和有机相，利用溶质在水和有机溶剂中的溶解度不同而达到分离的目的 ◆用于萃取的有机溶剂主要有乙醇、丙酮、丁醇、苯酚等。例如，用丁醇萃取微粒体或线粒体中的酶；用苯酚萃取RNA等。 ◆由于有机溶剂容易引起蛋白质(酶)和RNA的变性失活，所以在蛋白质(酶)的萃取过程中，应在0－10℃的低温条件下进行，并要尽量缩短蛋白质(酶)与有机溶剂接触的时间。 （2）双水相萃取 ◆双水相萃取的两相分别为互不相溶的两个水相。 ◆双水相萃取中使用的双水相一般由按一定百分比组成的互不相溶的盐溶液和高分子溶液或者两种互不相溶的高分子溶液组成。 ◆在双水相系统中，蛋白质、RNA等在两相中的溶解度不一样，分配系数不同，从而达到分离。 各种双水相系统 聚合物P 聚合物Q或盐 聚丙二醇 甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羟丙基葡聚糖，葡聚糖 聚乙二醇 聚乙烯醇，葡聚糖，聚蔗糖 甲基纤维素 羟甲基葡聚糖，葡聚糖 乙基羟乙基纤维素 葡聚糖 羟丙基葡聚糖 葡聚糖 聚蔗糖 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸镁，硫酸铵，硫酸钠，甲酸钠，酒石酸钾钠 ◆双水相形成的条件和定量关系可用相图表示，对于两种聚合物和水相组成的系统，其相图如图所示。 从图中可以看到，只有当P和Q的浓度达到一定时才能形成两相，◆影响蛋白质在两相中分配系数的主要因素有：(1)两相的组成，（2）高分子聚合物的分子量、浓度，极性等，（3）两相溶液的比例，（4）蛋白质的分子量、电荷、极性等，（5）温度、pH值等。对于蛋白质在两相中的分配系数，目前尚无成熟的理论可作为依据，需通过试验而确定。 ◆双水相萃取技术在生物分离中的应用： （1）中草药中有效成分的提取 中草药中含有大量的有机化合物且成分复杂，提高中草药的有效成分提取及分离技术对我国中药进入国际市场有很大的促进作用。双水相萃取技术作为一种新型的萃取技术已经成功的应用于天然产物的分离和提纯。近年来有关双水相提取天然药物中有效成分的报道逐年增多。以乙醇-磷酸氢三钾-水双水相体系萃取甘草有效成分，在最佳条件下，分配系数(K)12.8,收率（Y）高达98.3%【2】。用双水相萃取体系富集分离系数和分离效果【3】。 （2）双水相萃取系统已成功应用于蛋白质、生物酶、菌体、细胞、亲水性生物大分氨基酸、抗生素以及生物小分子等的分离和纯化。特别是近年来，国内外在此方面的研究有很大的进展。用聚乙二醇/羟丙基淀粉酶体系经两步法可从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶【4】。用PEG/(NH4)2SO4双水相体系，经一次萃取从淀粉酶发酵液中分离提取淀粉酶和蛋白酶【5】。用PEG/无机盐体系分离含胆碱受体的细胞【6】，用双水相体系从牛奶中纯化蛋白，用PEG/NaDS双水相体系对脊髓病毒和线病毒进行纯化【7】，用PEG/K2HPO4双水相处理青霉素G发酵液等的回收率、分配系数均达到较大值【8】. (3)双水相在金属离子分离中的应用 传统的金属离子溶剂萃取方法存在这溶剂污染环境、对人体有害、运行成本高、工艺复杂等缺点。近年来，利用双水相技术萃取分离金属离子达到了较高的水平。 （3）超临界萃取 超临界萃取技术（建成SPE）是