裂褶菌培养基形态学观察和致病性的动物试验研究.pdfVIP

n”!。【E【 目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………5 研究论文裂褶菌培养基形态学观察及致病性的动物实验研究 1I 前言…………………………………………………………………1 刖吾…………………………………………………………………l 材料与方法…………………………………………………………l1 结果……………………………………………：…………………．．19 附图…………………………………………………………………24 附表…………………………………………………………………43 讨论…………………………………………………………………47 结论…………………………………………………………………52 参考文献……………………………………………………………52 综述侵袭性曲霉感染药物治疗的研究进展…………………………54 致谢………………………………………………………………………66 个人简历…………………………………………………………………67 中文摘要 裂褶菌培养基形态学观察及致病性的动物试验研究 摘 要 commune)属真菌门，担子菌纲，伞 目的：裂褶菌(Sehizophyllum 菌目，裂褶菌科，裂褶菌属，广泛分布于世界各地。该菌多寄生于腐木 上，是林木常见的致病真菌。在对人类致病性方面，临床上以吸入其孢 子引起过敏反应较为常见，而由该菌引起人体深部组织感染病例罕见， 但近年来国外有关该菌引起人体深部组织感染的报道逐渐增多。本研究 所用菌株分离自我科会诊病人的痰液，经中国科学院微生物研究所鉴定 commune。 为SchizophyUum 本研究一方面通过对裂褶菌在五种不同培养基上的形态学特征进行 观察，寻找更适合其生长的培养基，为临床上诊断裂褶菌感染提供实验 室依据；另一方面，采用动物实验的方法，将裂褶菌悬液分别经皮下、 腹腔及静脉途径接种于不同免疫状态的小鼠体内，观察小鼠28天内的死 亡率，并通过组织真菌逆培养、组织载菌量测定及组织病理学等检查， 比较不同免疫状态下小鼠心、肝、脾，肺和肾等主要脏器的感染程度， 为进一步了解此菌的致病力及其引起的组织病理学改变提供实验室依 据。 方法：l 近5，端D1／D2区域，在DNA自动测序仪上进行直接双向测序确定碱基 通过系统树显示其亲缘关系。 2茵落形态学观察 2．1五种平皿培养基上菌落大体形态学观察将我科保存菌株常温复苏3 天，分别接种于沙堡氏琼脂培养基(SDA)，麦芽浸膏琼脂(MEA)、 上，’分别置于27C和37。C恒温箱培养2周，观察菌落生长情况、测量菌 落直径并绘制生长曲线。 将裂褶菌分别点种于以上五种培养基的小培养 2．2小培养(方块法) 上，27℃和37C恒温箱培养2周，观察菌丝生长、产孢情况。 中文摘要 2．3光镜观察取五种培养基生长良好的菌落标本置于载玻片上，经乳酸 酚棉兰染色，光镜下观察。 2．4扫描电镜观察取SDA培养基两个温度下培养7天的菌落标本，置 于4％的戊二醛中固定，常规制片后在扫描电镜下观察。 3生理学实验 3．1尿素酶试验将菌落接种于尿素琼脂培养基上，室温培养l周，观察 培养基变色情况。 3．2放线菌酮抑制试验将菌落分别接种于含有放线菌酮和不含放线菌酮 的沙堡琼脂培养基上，27℃和37℃恒温箱培养2周，观察菌落生长情 况。 4动物的致病性试验 4．1裂褶菌系统感染动物模型的制作将保存菌株复苏，转种于SDA培 养基上37。C培养7天。用无菌生理盐水制备成菌悬液，通过皮下、腹 腔、静脉三种途径接种至不同免疫状态的小鼠。 4．2死亡率观察连续观察各组小鼠感染该菌后28天内的自然死亡情况， 记录死亡日期和死亡只数。 4．3感染内脏大体观察将不同感染时