洁净区(沉降菌)检测标准操作规程.docVIP

1 目的 建立洁净度（沉降菌）的检验标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。 2 范围 适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 概述：本标准对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.2 测试方法 4.2.1 方法提要： 本标准按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2.2 仪器 仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2.1 培养皿 一般采用(90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。 4.3 测试前的规则： 4.3.1 测试状态； 4.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。 4.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 4.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。 4.3.2 测试人员： 4.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 4.3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 4.3.3 测试时间： 4.3.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正 常运行不少于10min后开始。 4.3.3.2 对非单向流，如B级、B级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 4.3.4 注意事项： 4.3.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.3.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.3.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.3.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 4.3.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.3.4.6 对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。 4.3.4.7 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口；采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。 4.3.4.8 培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿（TSA或SDA）一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。 4.4 测试步骤： 4.4.1 采样方法： 4.4.1.1 仪器和用具：培养皿。 4.4.1.2 方法： a 采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。 b 采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m～1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。 c 打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 最少采样点数目 面 积 （m2） 洁 净 度 级 别 面 积 （m2） 洁 净 度 级 别 A B B A B B ＜10 2～3 2 2 ≥200～＜400 80 20 6 ≥10～＜20 4 2 2 ≥400～＜1000 160 40 13 ≥20～＜40 8 2 2 ≥1000～＜2000 400 100 32 ≥40～＜100 16 4 2 2000 800 200 63 ≥100～＜200 40 10 3 注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风口面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。 最少培养皿数 洁净度级别 所需φ90mm培养皿数（沉降0.5h计） A 14 B 2 C 2 D