干细胞定向分化及中药干预探究现况.docVIP

干细胞定向分化及中药干预探究现况中图分类号：R285　文献标识码：A 　文章编号：1672―1349(2007)04―0331―03 干细胞是一种具有无限自我复制能力和向多种细胞分化潜能的细胞。现在被广泛研究的有胚胎干细胞和骨髓干细胞，前者指早期胚胎的多能于细胞(pluripotent cell)，后者指存在于骨髓中的具有多向分化潜能和自我更新能力的干细胞。目前认为骨髓中至少含有两种干细胞：造血干细胞(hematopietic stemcell，HSC)和间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)。近几年来将干细胞定向分化的神经细胞或神经前体细胞移植治疗神经系统疾病受到了广泛的关注，成为临床和实验研究的热点之一。因此如何将胚胎干细胞和骨髓干细胞定向分化为神经细胞或神经前体细胞是研究的关键所在。现主要就干细胞定向分化为神经细胞及中药干预的研究现况作一综述。 1　干细胞向神经细胞的定向分化 1.1　胚胎干细胞向神经细胞的定向诱导分化方法 目前胚胎干细胞定向分化的方法大致分为以下3类：①体外诱导法，此种方法很多，也是最为常用的，包括维A酸(维甲酸，RA)诱导、基质细胞源性的诱导活性、生长或分化因子诱导、按谱系限制性发育控制基因的方向进行分化等。其中华盛顿大学医学院Bain等[1]的维甲酸4－/4＋诱导法被视为最基本的，也是最经典的神经细胞诱导方法。虽然维甲酸是胚胎干细胞向神经细胞分化的有效诱导剂，但维甲酸诱导无法排除杂细胞的存在，且诱导后的神经细胞不能增殖，存活时间也短[2]。而谱系选择法诱导的神经前体细胞可以弥补这些缺陷，它使胚胎干细胞经历了胚胎干细胞－类胚体神经前体细胞终末类型细胞4个过程，较之维甲酸诱导法可能更接近于胚胎正常发育过程。因此，在胚胎干细胞移植研究领域，采用谱系选择法诱导出神经前体细胞进行移植将是一种趋势[3]。②导人外源性基因，使其分化为某一特定类型的细胞。③体内定向分化，使胚胎干细胞多数分化为该组织特异性的细胞。胚胎干细胞移植人体内后的迁移方向和分化的细胞类型受局部微循环的影响。 为找到胚胎干细胞定向分化的最佳条件，郭雨霁等[4]将从小鼠胚泡内细胞团中获取的胚胎干细胞进行体外培养，通过向培养液中分别加入维甲酸、大脑皮质细胞条件培养液＋维甲酸、β－巯基乙醇＋维甲酸＋大脑皮质细胞条件培养液，观察胚胎干细胞向神经细胞方向分化的情况。结果发现用维甲酸、β－巯基乙醇和大脑皮质细胞条件培养液联合诱导胚胎干细胞，可使70％以上的胚胎干细胞分化为神经元特异性烯醇化酶免疫阳性的神经细胞。并且认为联合应用对胚胎干细胞的诱导分化有明显的互补和协同作用。 1.2　骨髓干细胞向神经细胞的定向诱导分化方法定向分化为神经细胞的骨髓干细胞是指骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cells，BMSC)，又称为骨髓基质(干)细胞，简称骨髓干细胞。BMSC在合适的体外环境中可长期生长，呈成纤维样细胞表型，可诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、骨髓基质细胞、血管内皮细胞、肝细胞和神经细胞等[5，6]。BMSC具有来源广泛、分离培养容易、多向分化能力、易被外源性基因转染、植入反应低及无成瘤性等特点[7]。虽然当前分离纯化培养BMSC的方法很多，但骨髓细胞是一群异质细胞，成分复杂，BMSC缺乏特异标记分子。如何进一步对BMSC进行分离纯化，仍是一个亟须解决的课题[8]。 BMSC向神经细胞的定向分化研究主要也分体外培养和体内分化两部分。体外实验主要是在体外培养基中加入抗氧化剂或者生长因子以诱导分化。如姜晓丹等[9]采用梯度密度离心法分离获取成人骨髓源细胞，“CYTOKINE”培养主要含有细胞因子：胶质源性神经营养因子(GDNF)(20ng/mL)、维甲酸(0.5 ug/mL)、LIF(10 ng/mL)等，发现成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞。Iblack等[10]。报道骨髓干细胞能够在β－巯基乙醇、二甲基亚砜、3－叔丁基－4羟基茴香醚等抗氧化剂的诱导下分化为神经细胞。施雪英等[11]从大鼠股骨中分离、贴壁法体外扩增、传代培养骨髓干细胞，以二巯基乙醇(2－ME)预诱导，再加入2－ME、3－叔丁基－4羟基茴香醚诱导。结果也证实2－ME、3－叔丁基－4羟基茴香醚在体外能够有效的诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。汪泱等[12]将大鼠骨髓间充质干细胞分离培养后，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，结果发现阿魏酸钠诱导培养6 h后即可见细胞形态发生明显变化，24 h后表现为典型的神经细胞样形态，神经细胞特异性标志物呈阳性表达。 骨髓干细胞能够在体内分化为神经细胞，这些细胞具有广泛迁