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平卧菊三七中绿原酸提取及纯化工艺优化摘要：采用超声醇提法从平卧菊三七（Gynura procumbens）中提取绿原酸，设计正交试验考察乙醇体积分数、料液比、pH、超声功率对绿原酸提取率的影响。通过静态吸附—解吸试验优选适合绿原酸纯化的大孔树脂，并运用单因素试验优化动态吸附—解吸条件。结果表明，最佳提取工艺条件为乙醇体积分数70%、料液比1∶15（m∶V，g/mL）、pH 4、超声功率120 W，此条件下绿原酸得率为3.13%。HPD600型树脂对绿原酸有较高的吸附率和解吸率，优化后的吸附条件为上样流速2 mL/min、pH 3；适宜的洗脱剂为体积分数30%和50%的乙醇，纯化后绿原酸的纯度为77.4%。 关键词：平卧菊三七（Gynura procumbens）；绿原酸；提取；纯化 中图分类号：R284.2；S567.23+6 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4348—04 平卧菊三七（Gynura procumbens （Lour） Merr.）为菊科三七属多年生草本药食两用植物[1]，近代药理研究表明其具有降压[2，3]、降糖[4，5]、降脂[5]、抗氧化[6]、消炎[7]、抗癌[8，9]等功效。其主要活性成分有绿原酸、黄酮类、生物碱、萜烯类、香豆素类等[10—13]。绿原酸是植物在有氧呼吸过程中由磷酸戊糖途径（HMS）的中间产物合成的一种苯丙素类物质，它包括绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、莱蓟素等十多种同分异构体，具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、降糖、清除自由基等作用，是保健品、食品、药品及化妆品的重要原料。绿原酸在植物界广泛存在，在忍冬科和菊科植物中含量较高[14—17]。本研究采用超声波醇提法从平卧菊三七中提取绿原酸，并选用吸附容量大、选择性好、吸附迅速、解吸容易、再生简单的大孔树脂对其进行纯化，以期为进一步开发利用平卧菊三七提供理论指导。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 平卧菊三七叶采自江西农业大学中药园，烘干粉碎后过60目筛，装袋备用；绿原酸标准品由湖南浏阳艾特天然产物研究与开发有限公司生产；无水乙醇、盐酸、氢氧化钠均为分析纯；大孔树脂AB—8、S—8、NKA—2、NKA—9、X—5、HPD600、D101、H103均购于沧州宝恩吸附材料科技有限公司。 UV—754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；LXJ—ⅡB低速离心机（上海安亭科学仪器厂）；KQ3200DB型台式数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；pH计（Thermo电子公司）；恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；小型粉碎机（长沙市常宏制药机械设备厂）；ZHWY—1102型摇床（上海智城分析仪器制造有限公司）。 1.2 实验方法 1.2.1 超声波辅助乙醇浸提法提取绿原酸 ①提取工艺流程。称取1 g左右平卧菊三七叶样品粉末→加入适量石油醚挥干备用→超声波辅助乙醇提取→离心→取上层清液→定容至25 mL→吸取1 mL溶液定容到25 mL容量瓶，得平卧菊三七提取液[18]。②绿原酸标准曲线的绘制[19]。称取绿原酸标准品5 mg，用70%（体积分数，下同）的甲醇溶液定容于25 mL的容量瓶，配制成200 μg/mL的标准溶液，然后用移液管分别取上述标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于25 mL容量瓶中，用70%的甲醇溶液定容，配成浓度分别为8、16、24、32、40 μg/mL的标准溶液，用紫外可见分光光度计在波长328 nm下测定吸光度，得到绿原酸标准溶液浓度（X//μg/mL）与吸光度A328 nm（Y）的回归方程为Y=0.041 3X—0.015 7，R2=0.999 6（图1）。③正交试验优化绿原酸提取工艺。设计正交试验考察pH、料液比、超声波超声功率和乙醇体积分数对平卧菊三七中绿原酸提取率的影响，正交试验因素与水平见表1。 1.2.2 大孔树脂纯化绿原酸 1）工艺流程。平卧菊三七提取液→依次经石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取得水相液作为样液→上样于大孔树脂→不同体积分数的乙醇进行梯度洗脱→接绿原酸含量最高的洗脱液→旋转蒸发浓缩洗脱液除去乙醇→冷冻干燥得绿原酸粗品。 2）树脂的预处理[20]。各种树脂分别用双蒸水溶胀、浮选后，在1 mol/L NaOH溶液中浸泡4 h，用双蒸水洗至中性；然后用0.5 mol/L HCl溶液浸泡24 h，不断搅拌，用双蒸水洗至中性；再在70%（体积分数，下同）的乙醇溶液中浸泡24 h并不断搅拌，用去离子水洗至无白色浑浊、无乙醇味后用双蒸水浸泡待用。 3）树脂的静态吸附与解吸试验。①静态吸附。准确称取预处理好的树脂1 g，装入150 mL磨口三角瓶中，加入50 mL已测定浓度的样液，盖紧瓶塞，在