18β-甘草次酸抑制人结肠癌HT29细胞增殖探究.docVIP

18β-甘草次酸抑制人结肠癌HT29细胞增殖探究 　 【摘要】 　目的观察18β-甘草次酸（18β-glycyrrhetinic acid,GA）对人结肠癌HT29细胞增殖的影响，并从细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白（p16，p21，p27）表达丰度探讨可能的机制。方法以不同浓度的GA作用结肠癌HT29细胞后，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot分别检测细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白（p16，p21，p27）变化。结果GA作用HT29细胞后，增殖受到明显抑制。GA处理组细胞阻滞于G1/S期，并出现p16，p21，p27蛋白水平上调。结论GA可抑制人结肠癌细胞增殖，其机制与上调p16，p21，p27蛋白有关。 论文代写 【关键词】 18β-甘草次酸 结肠肿瘤 细胞周期 p16 p21 p27 论文代写 　　Abstract:ObjectiveTo observe the effects of 18β-glycyrrhetinic acid（GA）on proliferation, cell cycle and expression of CKIs of human colon carcinoma cell line HT29, and to investigate the mechanism of GA on colon cancer cell. MethodsAfter HT29 cells treated with varible dose of GA, we detectd the proliferation by MTT，and observed cell cycle by flow cytometer,and studied the protEin level of CKIs (p16, p21, p27) with Western blot. ResultsGA could inhibit the proliferation of HT29 cell, and cause G1 phase arrest.The protEIn of p16,p21 and p27 of cancer cells treated with GA were up-regulated in dose- and time- dependent manner. ConclusionGA could inhibit proliferation and induce differentiation in human colon cancer cell line HT29 through up-regulating the expression of CKIs, especially p16,p21 and p27. 　　Key words:18β-glycyrrhetinic acid; Colon cancer; Cell cycle cyclin-dependent kinase inhibitors(CKIs); p16; p21; p27 　　18β-甘草次酸（18β-glycyrrhetinic acid,GA）是从中草药甘草中提取的有效成分。研究发现，GA对一些肿瘤细胞生长具有一定的抑制作用［1,2］。但是其抗癌机制尚不完全清楚。P16，p21，p27蛋白是细胞周期重要的调控因子，属于细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白（cyclin-dependent kinase inhibitors，CKIs），对细胞周期具有负调控作用［3］。在多种肿瘤细胞系和实体瘤中都不同程度地存在CKIs表达失活的情况［4］。笔者以人结肠癌细胞HT29为模型，作用后，观察了GA对细胞增殖、细胞周期以及p16，p21，p27表达的变化情况，以探讨GA可能的作用机制。 　　 1 材料与方法 毕业论文 　　1.1 材料人结肠癌细胞系HT29购自 中国 科学 院上海生物化学和细胞生物学研究所，在37℃，5%CO2培养箱中培养，培养液为含10%小牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI-1640（GIBCO BRL）。 　　1.2 MTT法检测细胞增殖GA，购自Sigma公司。取对数生长期的HT29细胞，调整细胞浓度为1×104/ml，按每孔0.1 ml接种于96孔细胞培养板中。无血清RPMI-1640同步化后，加入GA。设立空白对照组和不同GA作用浓度实验组，每组3复孔。培养72 h后进行MTT比色并绘制GA浓度与A570之间的关系曲线。细胞抑制率（%）=［（A对照-A实验）/（A对照）］×100%。 毕业论文 　　1.3 流式细胞