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一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷含量 　作者：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐 【摘要】 目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.735，0.944，且在不同的实验条件下重现性良好(RSD=0.70%，0.56%);常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，Pgt;0.05，实验所得校正因子可信。结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依据。 【关键词】 一测多评; 高效液相色谱; 校正因子; 柴胡; 柴胡皂苷 中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控制模式，已不能适应全面控制中药质量的要求，多指标综合质量控制模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。由于多指标质量控制模式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。王智民等[1]利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定[1，2]。 　　中药柴胡为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物, 柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)及狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.(南柴胡)的干燥根，是一味疗效显著的常用中药，其主要活性成分为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及柴胡皂苷c，目前柴胡的质量评价主要以这3种成分作为指标[3～5]。由于柴胡皂苷结构复杂，在酸性条件下不稳定等，其对照品制备难度非常大，致使柴胡药材及制剂的质量难以准确控制。本文以柴胡皂苷a (SSa) 作为对照品，建立柴胡皂苷a与柴胡皂苷d (SSd)及柴胡皂苷c (SSc)的相对校正因子，并用相对校正因子计算柴胡皂苷d及柴胡皂苷c的含量。以统计学t-检验法对相对校正因子的计算值与外标法实测值进行比较，对不同品牌色谱柱、不同厂家的高效液相色谱仪及不同实验室的实验结果进行考察，综合评价一测多评法在柴胡药材中应用的准确性和科学性。 　　1 仪器与试药 　　Waters系列高效液相色谱仪，包括：Waters 600 controller，Waters 600 pump，Waters 2487 dual absorbance detector，Waters Empower 工作站。电子分析天平(上海天平仪器厂)，KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，乙腈、甲醇为色谱纯(Fisher公司)。Wahaha纯净水(市售)，提取用甲醇为分析纯(北京化工厂)。 　　柴胡皂苷a(批号110777-200406)和柴胡皂苷d(批号110778-200505)均由中国药品生物制品检定所提供，柴胡皂苷c由本实验室分离纯化，HPLC(面积归一化法)纯度gt;98%。柴胡药材收集自不同产地，经作者鉴定为北柴胡B. chinense DC.的干燥根。对照品结构式见图1。 　　图1 柴胡皂苷a (1)，柴胡皂苷d (2) 和柴胡皂苷c (3)的结构式 　　2 方法与结果 　　2.1 方法原理 在一定的线性范围内成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比，即：W=f×A[6]。在多指标质量评价时，以药材中某一典型组分(有对照品供应者)为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法。 　　假设某样品中含有i个组分，存在Wi/Ai=fi(i=1, 2,…,k,…,m)①。式中Ai为组分i的峰面积;Wi为i组分的量。选取其中一组分k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子，有fkm=fk/fm=(Wk×Am) /(Wm×Ak)②。由此可导出定量计算公式：Wm=(Wk×Am) /(fkm×Ak)③。式