不同预后尖锐湿疣组织中IFNγ及IL4蛋白表达.docVIP

不同预后尖锐湿疣组织中IFNγ及IL4蛋白表达 　【摘要】 目的：研究CA组织中干扰素γ（IFNγ）和白介素4(IL4)蛋白的表达情况并探讨其与尖锐湿疣复发和消退的关系. 方法：以12周内皮损有无复发作为标准分为复发组(22例)和未复发组（14例），以免疫组化SP法检测CA患者皮损中IFNγ和IL4蛋白的表达. 并比较两组IFNγ和IL4蛋白的表达情况. 结果：复发组中IL4蛋白阳性率（81.2%）高于未复发组中IL4蛋白的表达（50%）（Plt;0.05)；未复发组中IFNγ蛋白的阳性率（50.0%）高于复发组中IFNγ蛋白的阳性率（31.8%）（Plt;0.01）. 复发组IL4蛋白表达程度积分(2.32±1.13)虽高于未复发组(1.57±1.45)，但其差别无统计学意义（P＞0.05）；而在未复发组中IFNγ蛋白表达程度积分（2.86±1.10）高于复发组中的表达（0.96±1.05）（Plt;0.01）. 结论：CA皮损局部不同IL4蛋白表达差异对其预后无明显影响,IFNγ表达增高可能有利于CA的消退. 【关键词】 尖锐湿疣 ； 干扰素γ； 白介素4 0引言 尖锐湿疣（CA）是一种常见的性传播疾病，20~24岁人群中年发病率达1.2％［1-2］，治疗后复发率较高，而临床上也能将看到部分患者皮损可自行消退［3］，提示机体不同的免疫状态对CA的发生和复发有一定的影响. 因此研究CA的复发和消退机制对其临床治疗具有重要意义. 有关HPV的免疫学研究发现，细胞免疫对于病毒的清除起主要作用. 国内外多项研究也发现CA患者外周血中Th2细胞因子表达明显升高，Th1型细胞因子表达下降［4-5］，而对CA皮损局部免疫状态研究较少. 我们用SP免疫组化法研究IFNγ和IL4蛋白在不同预后CA患者皮损局部的表达情况，以探讨其与CA复发和消退的关系. 1对象和方法 1.1对象选择200301/03在我科首次就诊的CA患者36（男21，女15）例：年龄21~41（28.2±4.5）岁. 二氧化碳激光治疗前用手术刀切取CA患者的皮损保存，根据其治疗后随访12 wk内是否出现新发皮损分为未复发组(n=14)和复发组(n=22). 两组在年龄、性别和病变程度等方面均具有可比性. 以泌尿外科切除的15例正常包皮组织作为对照. 1.2方法治疗前手术刀切取CA患者的皮损后立即放入40 g/L福尔马林溶液中固定，经透明、浸蜡、包埋，然后连续5 μm厚切片，贴附于经多聚赖氨酸处理过的载玻片上备用. 免疫组化SP试剂盒购自迈新生物技术公司；小鼠抗人IFNγ, IL4单克隆抗体购自SANTA CRUZ公司. 病理切片常规脱蜡至水，滴1滴30 mL/L过氧化氢溶液，室温下阻断10 min，蒸馏水冲洗2 min×3次，微波炉内92~98℃保持10 min进行抗原修复，PBS冲洗5 min×3次，非免疫动物血清室温下封闭15 min，滴加IFNγ或IL4单克隆抗体，室温孵育60 min或4℃过夜，PBS冲洗5 min×3次，加生物素标记的二抗，室温下孵育40~60 min，PBS冲洗5 min×3次,加链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液，室温下孵育30~60 min, PBS冲洗5 min×3次, DAB显色液显色. 阴性对照以双蒸水代替一抗作为质控标准. 1.3结果判定标准根据Shimizu法改良而成，DAB染色阳性细胞染成棕黄色. 着色范围以百分率记分：≤1%为0，2%～20%为1，21%～50%为2，≥51%为3；着色强度依据深浅记分：无着色为0，浅着为1，深着色为2. 上述两项相加为着色程度积分：≤1.9为阴性(-)，2～2.9为弱阳性(+)，3～3.9为阳性(). ≥4为强阳性(). 统计学处理：组间表达阳性率比较采用精确概率法（Fishers Exact Test）进行检验；表达程度积分值比较采用t检验. Plt;0.05为有统计学意义. 2结果 健康对照皮肤中IFNγ和IL4蛋白呈阴性表达；CA患者皮损可见IFNγ和IL4蛋白表达，主要表达于真皮浅层淋巴样细胞周围. 复发组中有18/22（81.2%）例表达IL4蛋白， 未复发组中有7/14（50.0%）例表达IL4蛋白，复发组IL4蛋白表达率高于未复发组（Plt;0.05,图1)；复发组IL4蛋白表达程度积分(2.32±1.13)也高于未复发组(1.57±1.45),但其差别无统计学意义（Pgt;0.05）；复发组中有7/22（31.8%）例表达IFNγ蛋白，未复发组中有7/14（50.0%）例表达IFNγ蛋白，未复发组IFNγ蛋白的表达率高于复发组（Plt;0.01,图2），未复发组IFNγ蛋白表达程度积