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中药提取物对龙胆叶枯病病原菌抗菌活性筛选 　 作者：孙海峰 王喜军 王苏艳 杨婷 【摘要】 　　目的筛选抗龙胆叶枯病菌活性的中药。方法以龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）为供试菌种，对9种中药乙醇提取物进行抗龙胆叶枯病菌活性实验，采用有限稀释法，测定最低抑菌浓度。结果9种中药乙醇提取物均有抑菌作用，其中蛇床子、川楝子提取物14 d的最低抑菌浓度MIC100小于0.1 g/ml。结论蛇床子、川楝子具有较强的抗龙胆叶枯病菌作用，可进一步开发为防治龙胆叶枯病药物。 【关键词】 中药杀菌剂 抑菌作用 活性筛选 龙胆叶枯病 　　Abstract:Objective To screen the antifungal activity against Alternaria sp. of TCMs. MethodsThe antifungal activity against Alternaria sp. for the ethanol extracts of nine speices of TCMs was tested on Alternaria sp. Use limiting dilution to test the minimum inhibitory concentration.ResultsAll the ethanol extracts of TCMs exhibited inhibition on Alternaria sp.. The minimum inhibitory concentration of Fructus Cnidii, Fructus Tossendan was under 0.1 g/ml. Conclusion The antifungal activity of Fructus Cnidii, Fructus Toosendan against Alternaria sp.. is much stronger and can be developed. 　　Key words:Fungicides of TCMs； Inhibition； Screening； Rough gentian 　　龙胆叶枯病（Alternaria sp.）是龙胆生产中的重要叶部病害，发生普遍。在龙胆及其它药材生产中对病害的防治大量使用化学药剂，导致环境污染、农药残留，影响药材的质量。我国中药资源丰富，许多中药含抑菌活性物质［1～3］，从中寻找抑制植物病原菌活性物质，研制植物源新型杀菌剂，防治药用植物病害，对生产符合GAP标准中药材具有重要意义。 　　目前，国内外学者在中草药抗真菌实验方面已做了大量的工作 ［1～5］，而从中筛选抗药用植物病原真菌的研究较少。本研究根据以往中药抗真菌文献报道，选出9种中药，研究其对龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）的抑制作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 中药 　　地肤子、苦参 、知母、川楝子、蛇床子、大风子、苍耳子、白鲜皮、土槿皮购于哈尔滨市同泰大药房，经鉴定为正品； 95%乙醇（天津泰达化工有限公司），葡萄糖（沈阳市试剂三厂），琼脂（青岛水产品加工厂）。 　　1.1.2 供试菌种 　　龙胆叶枯病菌,从黑龙江北安栽培的粗糙龙胆Gentiana scabra Bunge中分离纯化得到，采用从病组织分离培养，将分离得到的菌种接种到PDA培养基上培养［6］，待产生孢子后，采用单孢分离的方法对菌种进行纯化。应用柯赫氏证病法则（Kochˊs postulate）证明为龙胆叶枯病病菌，通过对分生孢子梗、分生孢子等的观察鉴定为Alternaria sp.。 　　1.1.3 培养基 　　用PDA培养基。 　　1.2 方法 　　1.2.1 样品的制备 　　将中药样品于60℃烘干，经粉碎过20目筛，加5倍量的95%乙醇回流提取两次，2 h/次，滤过，滤液减压浓缩至1 g/ml（即每毫升含1 g生药）。浓缩液于冰箱（0～4℃）冷藏备用。 　　1.2.2 菌种活化 　　将保存的菌种接于PDA培养基上培养4d备用。 　　　1.2.3 抑菌实验 　　在无菌操作条件下，以1 g/ml生药的药液为原液，用灭菌PDA培养基稀释，分别 稀释为原液的50% ，40% ，30% ，20%，10% ，5%，1% ，0.8%，0.6%，0.4%，0.2%，0.1%（相当于每毫升含0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002，0.001 g生药）12个浓度的药基，对照为70%乙醇代替药液配制，并控制药基中的乙醇含量在15%以下（在配制高浓度的药基前，对加入的药液挥去部分乙醇），每管接种新培养的真菌菌落边缘2 mm2的真菌菌丝块