人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量反相高效液相色谱测定方法改进.docVIP

人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量反相高效液相色谱测定方法改进 　【摘要】 　　目的改进高效液相色谱法测定人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的方法。方法最佳色谱条件：ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）为色谱柱，采用梯度洗脱（乙腈与水），检测波长203 nm，流速1.0 ml/min。结果人参皂苷Re的回归方程为Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，线性范围为1.88 ～60.16 μg/ml，平均回收率为99.35% (RSD=0.49%,n=6)。结论采用改进的测定方法简单、准确和重现性好，适合人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的质量控制。 【关键词】 人参茎叶皂苷； 人参茎叶皂苷Re； 反相高效液相色谱 　　Abstract：ObjectiveTo improve the HPLC method for determination of ginsenosid Re in ginsenosides. MethodsODS column（150 mm×4.6 mm，5 μm） was used. The mobile phase consisted of CH3CN-H2O, the detection wavelength was 203 nm，and the flow rate was 1.0 ml/min.ResultsThe regression equation of ginsenoside Re was Y=9 505.448 8X－1 159.607 0 with a correlation coefficient of 0.999 8，and linear range was within the range of 1.88 ～60.16 μg/ml, the average recovery of ginsenosid Re was 99.35% (RSD=0.49%,n=6). ConclusionThis method is simple, quick, and reproducible and it is suitable for the quality control of Panax ginseng. 　　Key words：Panax ginseng； Ginsenosid Re； RP-HPLC 　　人参茎叶皂苷是从五加科植物人参的干燥茎叶中提取的有效成分经喷雾干燥而得，其中含有各种苷如人参皂苷Re。关于人参皂苷中人参皂苷Re的测定方法已有文献报道［1～4］，笔者也曾采用PR-HPLC法对人参茎叶皂苷中的人参皂苷Re的含量进行了测定，但有些样品中人参皂苷Re存在分离不完全的情况。为了准确地测定人参皂苷Re的含量，我们对该方法进行了改进和研究，采用梯度方法对人参皂苷Re的含量进行了测定。现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　岛津LC-2010A高效液相色谱仪（LC-10AD泵，SPD-M10AVP检测器，SIL-10VP自动进样器，Class-VP色谱工作站）；超声波清洗器（CSX-370，上海医用恒温设备厂）；电子分析天平（岛津公司）。 　　人参皂苷Re标准品，批号110754－200421，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供；甲醇为分析纯（广州市化学试剂公司），乙腈为色谱级（MERCK），水为重蒸水。人参茎叶皂苷粉由陕西禾博天然产物有限公司提供。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件Shim-pack VP-ODS分析柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为乙腈－水；流速1.0 ml/min；检测波长203 nm；柱温：35℃；梯度条件见表1。 　　表1 流动相的梯度洗脱（略） 　　在上述色谱条件下，人参皂苷Re与杂质完全分离，人参皂苷Re的保留时间约17 min（图1～3），理论塔板数按人参皂苷Re峰计算大于2 500。 　　图1 空白溶液高效液相色谱图（略） 　　图2 人参皂苷Re对照品溶液高效液相色谱图（略） 　　图3 样品溶液高效液相色谱图（略） 　　2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品5 mg（真空干燥至恒重）置25 ml量瓶中，加少量甲醇，超声溶解30 min，待溶液恢复常温后，用甲醇稀释至刻度，用0.22 μm的微孔滤膜过滤溶液备用。 　　　2.3 线性关系考察精密吸取上述人参皂苷Re对照品溶液，分别进样0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以人参皂苷Re对照品进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，人参皂苷Re的回归方程为：Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，在1.88～60.16 μg/ml范围内