右归丸对脾肾两虚证大鼠甲状腺激素及环核苷酸水平影响.docVIP

右归丸对脾肾两虚证大鼠甲状腺激素及环核苷酸水平影响 　作者：陈津岩，王立峰，赵慧，李志强，陈芝喜 【摘要】 【目的】通过观察甲状腺激素和环核苷酸水平的变化，探讨右归丸对实验性脾肾两虚证大鼠的防治作用，并从微观角度阐释脾肾之间的联系。【方法】选用SD雄性大鼠，随机分为正常对照组、模型组、右归丸组。前期采用大黄液灌胃(剂量为4 g/只)复制脾虚模型，后期采用氢化可的松肌肉注射(剂量为25 mg·kg-1·d-1)复制肾虚模型，分别给予蒸馏水、右归丸(剂量为58 g·kg-1·d-1)灌胃。观察动物的一般状态并测定血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)的含量。【结果】模型组大鼠血清T3、T4、rT3含量在脾虚和脾肾两虚时均显著降低(Plt;001)，血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值在脾虚和脾肾两虚阶段呈上升趋势(均Plt;001)，cGMP含量在脾虚时无显著变化(Pgt;005)，至脾肾两虚时则出现降低(Plt;005)。而右归丸组可提高两个阶段T3、T4、rT3含量(Plt;005或Plt;001)，前期脾虚时对环核苷酸无显著影响(Pgt;005)，后期可调节cAMP、cGMP含量及其比值(均Plt;001)。【结论】右归丸能够综合调整甲状腺轴激素含量和cAMP/cGMP比值从而防治脾肾两虚证。 【关键词】 右归丸/药理学;脾肾两虚/中药疗法;甲状腺激素;环核苷酸;疾病模型，动物;大鼠 脾肾两虚证在临床上较为常见，但实验研究中往往侧重研究单一脏器，涉及脾肾两脏损伤的则很少。本实验根据脾肾相关理论复制脾肾两虚模型,通过观察模型组从脾虚发展为脾肾两虚时大鼠血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)，血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)含量的变化，探讨脾肾相关的微观基础，并观察补肾方剂右归丸对脾肾两虚证的影响。现报道如下。 　　1材料和方法 　　11动物清洁级SD大鼠，雄性，体质量(200±20)g，由广州中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号为粤监证字2007A024，于广州中医药大学实验动物中心SPF级动物实验室饲养。 　　12药物右归丸为北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂产品，批号：7013033;氢化可的松注射液由天津金耀氨基酸有限公司生产，批号：200705252。 　　13试剂T3、T4、rT3、TSH放射免疫检测试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号cAMP、cGMP试剂盒由上海中医药大学提供，批号 　　14仪器SN695B型智能放免γ测量仪由上海原子核研究所日环仪器一厂生产。 　　15实验方法在适应性喂养2 d后，将36只大鼠随机分为3组，正常对照组11只，模型组13只，右归丸组12只。造模分2个阶段完成：第1阶段采用大黄液灌胃复制脾虚模型[1]，第2阶段在脾虚基础上采用氧化可的松肌注继续复制肾虚模型[2]。 　　第1阶段(14 d)：正常对照组用等容积蒸馏水灌胃，每天2次，每次2 mL;模型组上午以2 kg/L大黄液2 mL灌胃，下午以2 mL蒸馏水灌胃;右归丸组上午同模型组，下午灌服右归丸水溶液2 mL，给药剂量为58 g·kg-1·d-1。 　　第2阶段(11 d)：正常对照组每天肌肉注射生理盐水1 mL/只，同时灌服蒸馏水2 mL/只;模型组肌肉注射氢化可的松25 mg·kg-1·d-1，并灌服蒸馏水2 mL/只;右归丸组肌肉注射氢化可的松25 mg·kg-1·d-1，并灌服右归丸水溶液58 g·kg-1·d-1。 　　造模灌药期间，每天观察动物的一般状态(包括饮食、毛发、精神、活动等)。第14天眼眶取血，-40 ℃保存待测;第25天再次眼眶取血，并处死大鼠。采用放射免疫分析法(RIA)，观察各组大鼠各时间点血清T3、T4、rT3、TSH及血浆cAMP、cGMP含量的变化，所有样品一次完成实验，严格按试剂盒说明书要求进行操作。 　　16统计学方法实验数据采用SPSS 130统计软件进行分析处理。 　　　2结果 　　21实验动物数量分析实验过程中因灌胃操作失误及造模所用药物损伤等原因引起正常对照组死亡1只，模型组死亡3只，右归丸组死亡4只。共损失8只，最终进入实验结果分析第1阶段为30只，第2阶段为28只。 　　22一般状况正常对照组动物表现为：毛发顺滑，体质量日渐增加，双目有神，反应、活动灵活敏捷，叫声响亮，正常进食饮水。模型组大鼠于第4天出现便溏，以后逐渐加重;第14~25天时症状更加明显，体质量减轻，毛发枯燥松弛，肢冷，身体瘦削，