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明党参多糖提取分离及结构分析Ⅱ 　【摘要】 目的：提取分离明党参多糖，分析明党参多糖的基本结构。方法：明党参水提取液，经乙醇分级沉淀得粗多糖，再经Sephadex G200柱色谱分离纯化得明党参多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。通过高效液相凝胶渗透色谱法测得多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的平均分子质量分别为165200、10500、7600；由高效液相色谱、红外光谱、13C核磁共振、高碘酸氧化和Smith降解等方法分析其组成和化学结构。结果：多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ均由葡萄糖组成，其苷键构型均为α苷键。结论：明党参多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ为首次从该植物中得到。 【关键词】 明党参多糖 提取分离 结构分析 　　明党参为伞形科植物明党参Changium smyrnioides Wolff.的根，研究表明，明党参及其多糖具有一定的扶正固本、增强免疫和适应原样作用，在防治癌症和感染等疾病上有潜在的应用价值，而明党参多糖为其活性成分之一，在药效上发挥着重要的作用［1］。因此，对明党参多糖进行提取分离及结构分析对进一步的深入研究具有重要意义。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 FLEXIDRYmfMP冷冻干燥机(美国FTS公司)；BIOTEK高效液相色谱仪 (美国BIOTEK公司)；Alltech 500蒸发光散射检测器(美国Alltech公司)；752型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；LIBROR AEL24SM电子分析天平(日本岛津)；IR100红外分光光度计(美国尼高力仪器公司)。 　　1.2 试药 明党参药材采自江苏句容，经南京中医药大学鉴定教研室陈建伟教授鉴定为伞形科植物明党参Changium smyrnioides Wolff.的干燥根；葡萄糖、阿拉伯糖、果糖、半乳糖、鼠李糖等单糖标准品购自中国药品生物制品检定所；其他试剂均为分析纯。 　　2 提取分离 　　 　　明党参药材500g，4000ml 95%乙醇提取，药渣用4000ml、2000ml蒸馏水分别煮沸2h,离心，上清液冷冻过夜。抽滤，滤液加热，浓缩，至即将出现固体时停止加热，上清液加入乙醇依次成30%、50%、70%的乙醇溶液，静置过夜，离心，离心沉淀物先后用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，于40℃真空干燥箱中干燥，即得30%、50%、70%醇沉多糖。取醇沉多糖配成饱和溶液，经Sephadex G200柱色谱反复柱层析，依次用蒸馏水、0.1%、0.5%、1.0%的氯化钠水溶液梯度洗脱，用苯酚硫酸法检测洗脱曲线，50%、70%醇沉多糖分别得到白色粉末明党参多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。 　　3 纯度及相对分子质量检测 　　3.1 电泳法检测各多糖的纯度 取琼脂糖175mg加热溶于25ml(0.05mol/L)1，6己二胺缓冲液中，制胶，点上各多糖样品溶液，90V电泳3h，后用甲苯胺蓝染色60min，用乙醇脱色。电泳结果显示各多糖为单一斑点。 　　3.2 高效液相凝胶渗透色谱法(HPGPC)检测各多糖纯度和相对分子质量［2-4］ 　　3.2.1 样品溶液的制备 取多糖Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ粉末各2mg，溶于1ml蒸馏水中，离心后即得。 　　3.2.2 标准品溶液的制备 取DEXTRAN T1600，T380，T200，T70，T10和葡萄糖标准品各2mg，溶于1ml蒸馏水中，离心后即得。 　　3.2.3 色谱条件 色谱柱：TSKgelG5000 PWxl(7.8mm×30cm，日本TOSOH公司)；流动相：纯净水；流速：0.8ml/min；柱温：30℃；检测器：Alltech 500 ELSD；漂移管温度：110℃。 　　3.2.4 标准曲线 DEXTRAN T1600，T380， T70， T40，T10和葡萄糖标准品分子量与保留时间呈良好的线性关系，标准曲线y=9.63910.4644x，r=0.9990。 　　3.2.5 结果 多糖在色谱分析图中呈现单一对称峰，说明各多糖为均一多糖组分。与标准葡聚糖对照，明党参多糖Ⅲ为均一多糖，平均相对分子质量为165200；多糖Ⅳ为均一多糖，平均相对分子质量为10500；Ⅴ和Ⅵ为同一均一多糖，平均相对分子质量为7600。 　　4 结构分析 　　4.1 HPLC色谱法分析各多糖的单糖组成［5-6］ 　　4.1.1 色谱条件 色谱柱：lichrospher NH2；流动相：乙腈－水(80：20)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测器：Alltech 500 ELSD；飘移管温度：90℃。 　　4.1.2 样品溶液的制备 取各多糖粉末10mg，加2ml 1mol/L的H2SO4，封管105℃水解8h，碳酸钡中和，离心，取上清液，即得。 　　4.1.3 标准品溶液的制备 取葡萄糖、阿拉伯糖、果糖、半乳糖、鼠李糖等单糖标准品各2mg，溶于1ml