柴胡及其煎剂中皂苷类成分高效液相指纹图谱探究.docVIP

柴胡及其煎剂中皂苷类成分高效液相指纹图谱探究 　【摘要】 目的利用HPLC指纹图谱技术，全面揭示柴胡煎煮前后皂苷类成分的变化。方法采用Hypersil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 - 水, 梯度洗脱 [0 ～ 70 min: 乙腈 - 水 (22∶78) → (50∶50) ]; 流速1.0 ml·min-1;柱温30 ℃;检测波长210，252 nm。 结果柴胡煎煮后的指纹图谱中出现了9个药材中不存在的新色谱峰。 结论对柴胡煎煮中新出现的皂苷类成分进行深入系统的研究，将有助于从中医角度揭示中药柴胡功效的物质基础。 【关键词】 柴胡; 煎剂; 柴胡皂苷; 高效液相色谱; 指纹图谱 　　Abstract：ObjectiveTo disclose the changes of saikosaponins between Radix Bupleuri and its water extract by HPLC fingerprint technology. MethodsThe HPLC fingerprint was performed on a Hypersil C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with gradient elution of Acetonitrile - Water [0 - 70 min：Acetonitrile - Water (22∶78) → (50∶50)], the flow rate was 1.0 ml·min-1, the column temperature was set at 30 ℃, and the detection wavelength was 210 and 252 nm. ResultsNine peaks which did not exist in Radix Bupleuri were found in its water extract. ConclusionFurther research should be carried on the nine new components appeared in the water extract of Radix Bupleuri to explain the functions of Saiko. 　　Key words： Radix Bupleuri; Water extraction; Saikosaponin; HPLC; Fingerprint 　　已有报道指出，柴胡在煎煮过程中皂苷类成分存在结构的转变[1]，但是人们在柴胡的提取工艺研究当中，往往采取各种措施来避免这种转变的发生，如碱性溶剂提取[2]、低温浓缩[3]、渗漉等[3]，上述措施虽然提高了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的转移率，却导致了人们对柴胡煎剂中的皂苷成分，即转化的成分，缺乏深入系统的认识。煎剂作为传统中药临床用药的主要形式，是中医药理论建立的基础，对于煎剂中成分认识的程度决定了人们对中医中药认知的程度。基于此，我们采用HPLC指纹图谱技术首次对柴胡煎剂中皂苷类成分的全貌进行了研究，并与药材中的成分进行比较，为进一步揭示中药柴胡的功效奠定基础。 　　1 仪器与试药 　　Waters 600高效液相色谱仪，紫外检测器，Empower色谱工作站，KQ-50DB超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)，METTLER-AE 240型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)购于洛阳关林药材市场，经河南科技大学化工与制药学院王忠东教授鉴定为伞形科植物北柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根。乙腈(迪马公司，色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，其它试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 供试品溶液的制备 　　2.1.1 柴胡煎剂中皂苷类成分[4]取适当粉碎的柴胡药材20 g，10倍量水煎煮2次，1 h/次，趁热过滤，合并滤液，水浴浓缩，最后定容至50 ml量瓶中。取2.5 ml上述浓缩液(折合生药材1.0 g)，上样于装有10 ml大孔吸附树脂的层析柱，进行动态吸附，待吸附完毕后，先用体积分数为5% 的NaOH 水溶液50 ml洗脱，弃去;然后用水洗脱至流出液为中性;再用体积分数为30% 的乙醇溶液50 ml洗脱，弃去;最后用体积分数为95%的乙醇溶液160 ml洗脱，收集体积分数为95%的乙醇溶液洗脱部分，于水浴上浓缩至干，用体积分数为50%的乙醇定量转入10 ml量瓶中，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.1.2 药材中皂苷类成分[5]取柴胡药材粗粉1.0 g