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海蓬子总黄酮提取工艺优化探究 　 作者：顾婕， 杨莉萍， 赵微加， 叶辉　张春银 【摘要】 目的用单因素和正交实验法优选海蓬子中总黄酮的提取工艺。方法采用乙醇提取工艺，对影响黄酮提取得率的主要因素进行分析，用正交实验法确定海蓬子中总黄酮的提取工艺。结果最佳提取工艺条件：乙醇浓度70%，提取时间120min，固液比1∶100(g∶ml)，提取温度80℃。在该条件下，海蓬子总黄酮得率为2.86%。结论该方法是提取海蓬子中总黄酮的有效途径。 【关键词】 海蓬子; 黄酮; 乙醇提取 海蓬子Salicornia bigelovii Tor属于藜科海蓬子属(又译盐角草属)植物[1]，直接用海水灌溉。海蓬子种子含油量约30%，其中不饱和脂肪酸含量高达90%[2，3]，其嫩尖组织中的微量皂角苷，可中和人体血液中的脂肪酸，降低血管壁上胆固醇，具有降压、降脂、减肥作用。在欧洲，海蓬子被称为“减肥草”[2]。除含有人体必需的氨基酸、微量元素、维生素外，其中的胡萝卜素含量超过普通蔬菜的40倍[4]，可作为绿色有机蔬菜、保健食品、保健油等的原料。栽培海蓬子还有益于改良生态环境，它吸收与利用海水水产养殖池排污物的营养;构建生态湿地，为野生禽类提供食物和栖息地等[5]。海蓬子在我国江苏、辽宁、河北、山东等省都有生长，多见于盐沼地、盐湖旁及海滩。从海蓬子中分离得到槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucoside)、芸香苷(rutin)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(isorhamnetol-3-O-β-D-glucoside) 等黄酮类物质[6～8]，但还未见提取工艺研究的报道。为了提高海蓬子中总黄酮提取工艺的科学性，进一步研究和开发利用海蓬子，特以总黄酮为考察指标，采用单因素和正交实验法确定最佳的提取条件。黄酮类化合物多采用水、乙醇、丙酮等溶剂提取，总黄酮包括黄酮苷及其苷元，黄酮苷易容易水和乙醇，但苷元的水溶性差，故本研究以乙醇为提取溶剂。 　　1 材料与仪器 　　新鲜海蓬子由江苏省盐城市绿苑海蓬子开发有限公司提供。全草淋洗沥干后70℃鼓风烘干，粉碎过60目筛，密封于阴暗干燥处保存备用。芦丁(生化试剂)购自中国医药集团上海化学试剂公司，95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。UV-1200紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)、DK-600电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司)、电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、FZ102微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。 　　2 方法 　　海蓬子总黄酮含量的测定——NaNO2-Al(NO3)3比色法[9]。 　　2.1 芦丁标准曲线的绘制[10]用分析天平称取芦丁标准品0.025 0g，用30%的乙醇溶解，定容至100 ml，摇匀，得到0.25mg/ml的芦丁标准溶液，备用。分别准确吸取芦丁标准溶液1.0 ，2.0 ，4.0 ，6.0 ，8.0 ml于25 ml的容量瓶中，用30%乙醇补至约12.5 ml，加入5%亚硝酸钠1.0 ml，摇匀，放置5 min，加入10%硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min。加入1.0 mol/L 氢氧化钠溶液5 ml，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置10 min。用空白液作参比，用紫外可见分光光度计测定510 nm处的吸光度。所得标准曲线为芦丁浓度Y和吸光值X的关系，所得回归方程为：Y=11.363X-0.034 2，r = 0.999 8。 　　2.2 海蓬子总黄酮的提取及测定称取1.00 g海蓬子粉末于锥形瓶中，按一定的料液比，加入一定浓度溶剂在一定温度下提取一定时间。离心得上清提取液，加入相应的溶剂定容至100 ml。 　　准确吸取定容后的2 ml水提取液或乙醇提取液于25 ml容量瓶中，用30%乙醇补至12.5 ml。加入5%亚硝酸钠1.0 ml，摇匀，放置5 min后加入10%硝酸铝1.0 ml，放置6 min后再加入1 mol/L氢氧化钠5 ml，混匀。用30%乙醇定容至刻度，10 min后以空白液为参比测定510 nm处的吸光度。 　　样品黄酮得率的计算公式如下： 　　X(%)=c×v2×25×10-3M×V1×100% 　　X=样品总黄酮得率(%); C=提取液中的总黄酮含量(mg/ml); 　　M=海蓬子样品的质量(g); V1=测定吸光度所用的样液体积(ml); 　　V2=样品定容后的体积(ml)。 　　　3 结果 　　3.1 提取温度对总黄酮得率的影响称取1.00 g样品，加入80ml 70%的乙醇，分别在20，40，60，80，100℃温度下提取60 min，考察提取温度对黄酮得率的影响。结果(图1)表明，温度达到80℃时，黄酮的得率最高。因此最