理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液中sIgA干预作用.doc

理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液中sIgA干预作用 　【摘要】 目的 观察肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量及理肺通络方的干预作用。方法 将40只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(MPFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)造成肺炎支原体肺炎模型。造模第11 d起，除正常组外，其余各组分别灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2 mL/只。中药组连续服药10 d，西药组前、后3 d灌药液，中间4 d灌生理盐水。在治疗的第11 d处死动物，观察各组大鼠血清MP|IgM滴度及右肺组织形态学，采用放免双抗夹心法检测sIgA含量。结果 模型组大鼠血清MP|IgM阳性，光镜下显示肺组织炎性细胞浸润和组织损伤明显;与正常组比较，模型组、中药组、西药组肺泡灌洗液中sIgA含量显著降低，有高度统计意义（Plt;0.01）;与模型组比较，中药组、西药组sIgA含量显著升高（P lt;0.01）;中药组与西药组比较有统计意义（Plt;0.05）。结论 肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量下降，理肺通络合剂能提高呼吸道局部sIgA含量，且优于西药阿齐霉素，可能有助于降低再次感染的几率。 【关键词】 肺炎支原体肺炎；理肺通络方；肺泡灌洗液；分泌型IgA 分泌型免疫球蛋白A（sIgA）广泛存在于血液及各种分泌液中，它是分泌液重要的免疫蛋白种类，是机体特异性的防御因素。本实验观察了理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量影响，探讨本方对于增加sIgA含量、提高气道局部防御功能方面的作用。 1 材料及方法 1.1 材料选择6周龄SPF级雄性Wistar大鼠40只，质量（150±10）g，由湖北省疾控中心提供[许可证号：SCXK（鄂）2003-0005],颗粒饲料喂养。理肺通络方由黄芪20 g、沙参10 g、紫菀10 g、枳实10 g、百部10 g、麻黄7 g、杏仁10 g、蜈蚣1条、甘草6 g组成，由湖北省中医医院中药房煎煮成浓度为3 g/mL药液，高压灭菌后置冰箱中备用；阿齐霉素临用前配成5.5 mg/mL溶液[按50 mg/（kg·d）计算]；sIgA放免试剂盒（北京北方生物技术研究所提供）；肺炎支原体抗体被动凝集诊断试剂盒（富士瑞必欧株式会社提供）；GL-20G-Ⅱ冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂生产）；WKYⅢ型微量移液器（上海荣泰生化工程有限公司生产）。 1.2 方法 1.2.1 实验分组及样本处理40只大鼠随机分为4组：正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。经3 d适应性饲养后，用乙醚麻醉动物，模型组、中药组及西药组一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(MPFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)0.3 mL/只，正常组予生理盐水0.3 mL/只滴鼻。造模第11 d起，分别灌胃灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2 mL/只。模型组、中药组连续灌胃10 d；西药组前、后3 d灌服药液，中间4 d灌服生理盐水。在治疗的第11 d处死动物，摘眼球取血，检测正常组、模型组血清MP|IgM。暴露大鼠胸腔，结扎右肺，左肺用生理盐水2 mL行肺泡灌洗，灌洗液置-70 ℃冰箱中备用，检测各组sIgA含量。取肉眼可见病变的右下叶肺组织,用10 %福尔马林固定、石蜡包埋、切片、HE染色,光学显微镜下观察。 1.2.2 肺泡灌洗液sIgA 检测本试剂盒采用放免双抗夹心法，可检测血清及各种分泌液中的sIgA。采用的双抗体均是针对sIgA中分泌成分SC的特异抗体。包被在聚苯乙烯球上的抗体与样本中的sIgA形成免疫复合物“抗体-sIgA”，然后加入标记抗体125I-抗体，形成三层夹心免疫复合物“抗体-sIgA-125I-抗体”。测定每个小球上的125I 放射性计数率(cpm)值，与标准曲线或标准值cpm对照计算，即可知样品中sIgA含量。检测操作步骤首先对样品进行1∶10稀释，具体步骤见表1。表1sIgA放射免疫操作步骤 各管cpm值先减去S0 cpm值后再计算，用双对数直角坐标作图（横坐标为浓度，纵坐标为cpm值），查出浓度应乘以稀释倍数即为原标本浓度。 1.2.3 统计学处理所有测定指标均采用±s表示,组间比较采用ｔ检验,以Plt;0.05、Plt;0.01表示有统计意义。 　 2 实验结果 2.1 大鼠血清Mp|IgM滴度及肺组织形态学检查实验结果显示，模型组大鼠血清MP|IgM 滴度显著增高（见表2）。光镜下HE染色，正常组肺组织仅个别大鼠小支气管有少数淋巴样细胞浸润；模型组可见肺泡间隔增宽，支气管、细支气管周围与肺泡间隔内毛细血管明显充盈，有程度不等的淋巴样细胞，个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变（见图1