芹菜素对黄嘌呤氧化酶电极抑制作用探究.doc

芹菜素对黄嘌呤氧化酶电极抑制作用探究 　摘　要：目的：研究在XOD／SWNTs-DDAB修饰电极上芹菜素黄嘌呤氧化酶的抑制作用。方法：将黄嘌呤氧化酶固体与SWNTs-DDAB修饰电极上，并且保持酶的生物活性，采用循环伏安法研究芹菜素对黄嘌呤氧化酶电极的抑制作用。结果：SWNTs-DDAB修饰膜能够保持酶的生物活性并对黄嘌呤的催化活性；此修饰电极对黄嘌呤比较敏感；芹菜素能够明显的抑制嘌呤氧化酶。结论：SWNTs-DDABmo膜是较好的固定酶修饰膜，运用电化学方法筛选酶的抑制剂是可行的，确定了芹菜素对酶的抑制作用。 关键词：黄嘌呤氧化酶；单臂碳纳米管；双十二烷基二甲基溴化铵；芹菜素；电化学 　　芹菜为伞形科植物。由于它们的根、茎、叶和粒都可以当药用，故芹菜具有较高的药用价值[1]。芹菜素作为一种天然存在的黄酮类花合物，具有抗肿瘤、抗炎症、降血压、抗动脉硬化和血栓症、抗焦虑、抗菌抗病毒以及抗氧化作用多种药理活性。然而，菜素药理学作用的研究大多处于体外实验和动物膜性阶段，作用机理仍不清楚，还需进一步研究，使其能够早日进入临床应用。 　黄嘌呤氧化酶简称XOD，生物体内核酸代谢过程中的重要酶类[2]，广泛分布于人体的心、肺、肝等组织细胞浆内。XOD是一种氧化还原酶类，可以把脂肪族、芳香族醛氧化成羧酸；催化黄嘌呤、次黄嘌呤氧化生成尿酸，并产生过氧化物自由基。尿酸浓度过高会导致高尿酸血症，并可引起痛风发作。自由基涉及到炎症、硬化、癌症和衰老等病理过程。黄嘌呤氧化酶的结构非常复杂，因此很多物质都可抑制其活性。黄嘌呤氧化酶抑制剂可以减少自由基造成的应激反应和对组织的伤害，也可以减少人体内尿酸的形成，是治疗痛风的重要药物，并能减少一些致命性的痛风并发症。 　循环伏安法不仅可以发现、鉴定电化学反应产物，还可鉴定电化学-化学偶联反应过程的产物。因此我们选用SWNTs-DDAB膜修饰热解石墨电极，将黄嘌呤氧化酶固定于上，运用循环伏安法研究了芹菜素对黄嘌呤氧化酶的抑制作用，此方法简单、迅速、费用小，有望成为一种新的酶抑制剂筛选方法。 　1 仪器、试剂和药品 　1.1仪器：LK2005恒电位仪（天津市兰力科化学电子高科技有限公司）MEC—12B型多功能、电化学分析仪（江苏江分电化学分析仪器有限公司）、SYZ—550型石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂）、KQ—500DE型舒美数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、F—A2004电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）、PB—20标准型PH（德国赛多利斯股份公司） 　1.2试剂：无水乙醇(CH3CH2OH) 99.7% 分析纯哈尔滨市新达化工厂、氯化钾（KCI）990.8% 分析纯哈尔滨化工化学试剂厂、氯化钠（ＮａC1）99.5%分析纯天津市北方化玻购销中心、磷酸氢二钠（Na2HPO）99.8%分析纯 哈尔滨化工化学试剂厂、磷酸二氢钠（KH2PO4）99.8%分析纯 哈尔滨化工化学试剂厂、氢氧化钠（NaOH）96.0%分析纯天津市广成化学试剂限公司、醋酸（CH3COOH）99.5% 分析纯齐齐哈尔轻工学院试剂厂、磷酸（H3PO4）85.0% 分析纯哈尔滨化工化学、硼酸（H3BO）99.5%优级纯朝阳化工厂、铁氰化钾（K3Fe(CN)6）分析纯哈尔滨市新达化工厂、高纯氮气（N2） 哈尔滨卿华工业气体有限公司、所用水均为二次蒸馏水 　1.3药品：单壁碳钠米管（SWNT）深圳纳米港有限责任公司、黄嘌呤氧化酶（XOD）Sigma公司、双十二烷基二甲溴化铵（DDAB）Sigma公司、黄嘌呤Sigma 公司、芹菜素 Sigma 公司。 　2 实验方法 　循环伏安法：电化学测试在三电体系中进行：修饰电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极。实验前，溶液氮气15min，整个实验在氮气氛中进行，温度为室温。所用PBS由磷酸氢二钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH2PO4）配制，其ph值为5.06。所用试剂均由二次水配制。 　3 实验结果 　3.1温度对修饰电极的影响：在含有7.5×10-4M黄嘌呤的PBS中我们研究了温度对酶的影响，峰电流随温度的增加而增大，单高于37℃后峰电流降低。这与蛋白质酶的温度性相符，温度过高会引起蛋白质变性，从而使活性降低。 　3.2黄嘌呤氧化酶与芹菜素相互作用的电化学：芹菜是一种来自蔬菜和水果，相对无毒、无刺激性的黄酮类化合物。与其他黄酮类化合物相比，芹菜素对XOD的抑制类型与嘌呤醇相似，都属于竞争性抑制。为了评价芹菜素对酶的抑制作用，我们利用循环伏安法研究了芹菜素与与酶的相互作用。在5×10-4M黄嘌呤溶液中，依次加入不同浓度的芹菜素，随着芹菜素浓度的增加，黄嘌呤氧化酶的峰电流和其催化峰电流都在逐渐减小。 　4 讨 论 　4.1最佳修饰电