菟丝子黄精颗粒剂对雷公藤多苷所致生殖损伤雌鼠卵巢损伤及smad4.docVIP

菟丝子黄精颗粒剂对雷公藤多苷所致生殖损伤雌鼠卵巢损伤及smad4 　【摘要】 目的研究雷公藤多苷（GTW）对卵巢组织smad4 mRNA表达的影响以及菟丝子与黄精的干预作用。方法采用4周龄SD雌鼠，将实验大鼠据体质量随机分3组，分别为空白对照组、GTW组、干预组，连续灌胃12周后处死动物检测指标。结果GTW组卵巢次级卵泡数值最小，与空白组间差异有统计学意义（P＜0.05），与干预组间差异也有统计学意义（P＜0.01），空白组与干预组间差异没有统计学意义（P＞0.05）；黄体数比较各组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。GTW组smad4 mRNA表达与空白组间差异有统计学意义（P＜0.01），与干预组间差异也有统计学意义（P＜0.05）；空白组与干预组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论雌性幼鼠服用雷公藤多苷可造成卵巢组织病理改变，其中smad4 mRNA表达的下降可能是GTW导致雌性生殖损伤的关键点之一。中药菟丝子、黄精可以促进该过程的修复。 【关键词】 雷公藤多苷； 幼鼠； 卵巢； 生殖损伤 雷公藤多苷（glycosides of Tripterygium wilfordii Hook. F，GTW）是从植物雷公藤根芯部提取的一种有效组分［1］,因其可靠的疗效日益成为儿科肾脏疾病治疗中不可或缺的治疗药品之一。GTW的疗效是毋庸置疑的，但副作用也不容忽视，尤其是未成年人用该药是否会导致成年后的生殖损伤尚无定论。如何最大程度地发挥GTW的治疗效应同时最大限度地降低其副作用是当前儿科迫切需要面对的课题。为探讨解决这一问题的方法，本课题对GTW是否会影响卵巢组织smad4 mRNA的表达进行了研究，同期还研究了菟丝子黄精颗粒剂对此的干预作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药物与试剂雷公藤多苷生药粉（GTW），江苏美通制药有限公司提供。菟丝子黄酮粉，西安昂盛生物技术有限公司提取。批号规格：10％。原位杂交探针合成，天津灏洋科技生物技术有限公司；原位杂交试剂盒、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂，Sigma公司产品。 　　1.2 仪器VL-4S型超净台，珠海市再鑫仪器有限公司；RM2245石蜡切片机，德国莱卡；EG1150自动包埋机，德国莱卡； OLYMPUS-BX51,CH30显微镜，日本奥林巴斯公司产品；IMAGER-Pro Plus6.0彩色病理图像分析系统。 　　1.3 动物清洁级雌性SD大鼠，4周龄，体质量（60±10）g，每组12只。购自河南省实验动物中心。饲养1周后无异常开始实验。 　　2 方法 　　2.1 分组及给药动物根据体质量随机分3组，分别为空白对照组（羧甲基纤维素钠CMC-Na）、阳性对照组（GTW）、干预组（菟丝子黄精颗粒剂组）。空白组予1%CMC-Na溶液；阳性组予9 mg/kg GTW混悬液（用CMC-Na溶液配制）；干预组予GTW混悬液加菟丝子黄精溶液（1 g/kg）。各组均连续灌胃12周后处死动物，检测指标。 　　2.2 指标检测 　　2.2.1 卵巢组织病理乙醚麻醉后取卵巢，放入当日配制的10％甲醛固定液中。常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，普通光镜下观察并图像分析。 　　2.2.2 原位杂交法检测卵巢组织中smad4 mRNA表达探针序列：smad4 mRNA 5-TGCTG AAGAT GGCCG TTTTG GTGGT GAG-3。检测步骤：具体参照说明书进行。原位杂交检测结果判定：组织石蜡切片经原位杂交、DAB显色后，可在光镜下观察到mRNA阳性产物呈黄色或棕褐色颗粒。采用Imager-pro Plus 6.0图像分析系统分析阳性细胞表达强弱，测试各级卵泡中卵母细胞、颗粒细胞以及卵泡膜细胞中染色阳性细胞的灰度值。每组检测不少于6张切片。 　　2.3 统计学方法实验数据用SPSS 14.0软件包分析。统计学处理结果以±s表示，样本数据比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)。 　　3 结果 　　3.1 卵巢组织smad4 mRNA表达 　　结果见表1。表1 菟丝子黄精与雷公藤多苷用药后卵巢组织smad4 mRNA表达统计(略) 　　3.2 卵巢组织病理改变空白组卵巢体积较大，卵泡生长活跃，卵泡形态、数量正常。颗粒细胞层次多，排列整齐，卵泡液含量多。黄体发育好。雷公藤多苷组各级卵泡数量减少，部分成熟卵泡颗粒细胞层次减少，排列紊乱、疏松。菟丝子黄精组各级卵泡数量多，生长活跃，成熟卵泡多，体积大，颗粒细胞排列整齐。闭锁卵泡较少。黄体发育良好。 　　卵巢次级卵泡数结果：空白组与GTW组间差异有统计学意义（P＜0.05），与干预组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。GTW组与其他两组间差异（P＜0.05）。卵巢黄体数比较各组间差异没有统计学意义（P＞0.05