葡聚糖磁流体热处理对小鼠H22移植瘤生长影响及机制浅谈.docVIP

葡聚糖磁流体热处理对小鼠H22移植瘤生长影响及机制浅谈 　【摘要】 目的 探讨磁流体热处理对小鼠H22移植瘤生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达和凋亡状况的影响。方法 将接种了H22肝癌细胞的小鼠随机分为4组。对第4组移植瘤内注射葡聚糖磁流体，在55kHz，20kA/m交变磁场中作用10min。第1、第2、第3组作为对照，分别对瘤内注射盐水不加磁场，注射盐水加磁场和注射磁流体不加磁场。两周后处死动物，称瘤重，计算抑瘤率。另两组动物分别瘤内注射磁流体和等体积盐水，作为处理组和对照组，在经磁场处理后1h、5h、24h、48h和336h处死，检测瘤组织的VEGF表达和凋亡状况。结果 第4组移植瘤内的温度可达到46℃～48℃。与第1、第2、第3组相比，第4组抑瘤率分别为：59.74%、52.51%和40.35%，其中与第1组差异有显著性（Plt;0.05）。磁热处理后不同时间，处理组肿瘤组织的VEGF表达和凋亡状况与对照组的比较差异均无显著性。结论 单次磁流体热处理可以显著抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长。抑制VEGF表达和诱导凋亡不是抑制移植瘤生长的主要原因。 【关键词】 热处理 磁流体 抑瘤作用 血管内皮生长因子（VEGF） 凋亡 　　0 引言 　　近年来随着纳米材料与技术的发展，Jordan等[1]提出了“磁流体热疗”的概念。 　　目前磁流体热处理对肿瘤生长的抑制作用，已有一些实验证据支持，但其抑制肿瘤的分子机制和作用途径，尚不清楚。本文观察了磁热处理对H22移植瘤生长的影响以及热处理后不同时间肿瘤组织的血管内皮生长因子（VEGF）表达和凋亡状况，对磁热处理抑制肿瘤生长的机制进行初步探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及细胞 　　20g左右雄性Balb/c小鼠（SPF级）购自上海实验动物中心。小鼠H22肝癌细胞株引自河北医科大学实验动物学部。 　　1.2 移植瘤模型的建立与处理 　　Balb/c小鼠后腿根外侧皮下接种H22肝癌细胞1×107/0.1ml，4d后随机分为4组，每组8只。1组注射生理盐水不加磁场；2组注射生理盐水加磁场；3组注射磁流体不加磁场；4组注射磁流体加磁场。分别对小鼠移植瘤内及瘤周分5点注射0.2ml葡聚糖磁流体（含24.16mg磁性粒子，粒子平均直径为15nm，自制）或等体积生理盐水后，置于交变磁场中（纳米超顺磁热疗仪，自制，磁场强度55kHz，20kA/m），作用一次，10min。每组随机抽取3只动物，用光纤温度计（FTI10光信号处理器和FOTM医用光纤温度传感器，FISO公司，加拿大）实时监测移植瘤中心部位的温度，另3只监测直肠温度。两周后处死动物，称瘤重，计算抑瘤率。 　　抑瘤率＝（对照组瘤重 － 处理组瘤重）/对照组瘤重×100 % 　　另两组动物如前法接种，分组，注射，分别瘤内注射0.2ml磁流体和等体积生理盐水，在经磁场处理后1h、5h、24h、48h和336h处死，每次3只，以注射但未经磁场处理1h后的动物作为对照，检测组织中的VEGF表达和凋亡情况。 　　1.3 组织学观察 　　对肿瘤组织的石蜡切片做HE染色后，进行组织学观察。 　　1.4 VEGF表达检测 　　1.4.1 免疫组化法 对肿瘤组织的石蜡切片做免疫组化检测。一抗为兔抗小鼠VEGF多抗（购自友谊中联生物科技有限公司），二抗为生物素标记的羊抗兔IgG（购自华美生物工程公司）。以磷酸盐生理盐水缓冲液（PBS）代替一抗作为对照。 　　1.4.2 流式细胞分析 将肿瘤组织研过铜网，用PBS缓冲液制成细胞悬液，调细胞浓度为1×106/ml，加入兔抗小鼠VEGF抗体，作用1h，PBS洗3次，加入FITC羊抗兔IgG（购自华美生物公司）30min，PBS洗3次，过滤，上机检测。（FACS Aria 流式细胞分析仪，BD公司，USA，激发光波长488nm），以PBS代替一抗作为对照。 　　1.5 凋亡检测 　　1.5.1 原位凋亡检测 对肿瘤组织的石蜡切片做原位凋亡检测，TUNEL法（TUNEL试剂盒购自华美生物公司）。 　　1.5.2 流式细胞分析 肿瘤组织用PBS研过铜网制成细胞悬液，调细胞浓度为1×106/ml，加入碘化丙啶（PI）染色，过滤，上机检测。 　　2 结果 　　2.1 磁热处理对移植瘤生长的影响 　　磁流体加磁场组瘤内温度可以达到46℃～48℃。磁热处理后各组的瘤重，见表1。与3个对照组比较，磁流体加磁场组抑瘤率均大于30%，但只与盐水组比较，差异有显著性Plt;0.05。 　　表1 经磁热处理后各组的瘤重（略） 　　1. 注射生理盐水；2. 注射生理盐水加磁场；3. 注射磁流体；4. 注射磁流体加磁场（*Plt;0.05） 　　　2.2 组织学检测 　　瘤内注射后磁流体可