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重组慢病毒载体介KSHV分子开_省略_BL_1细胞中的表达及其功能鉴定_陈菲
24 2 ( ) Vol． 24 No． 2
第 卷第 期 江苏大学学报 医学版
2014 3 Journal of Jiangsu University (Medicine Edition) Mar． 2014
年 月
重组慢病毒载体介导KSHV 分 Ｒta
子开关蛋白 在
BCBL -1 细胞中的表达及其功能鉴定
， ，
陈菲 严沁 卢春
( ， 210029)
南京医科大学微生物与免疫学系 江苏南京
［ ］ : (Kaposis sarcoma-associated herpesvirus ，KSHV) ，
摘要 目的 构建含卡波氏肉瘤病毒 分子开关蛋白 即复制和转录
(replication and transcriptional activator ，Ｒta) 。 : pcDNA3．1-Ｒta
激活蛋白 基因的重组慢病毒载体 方法 从真核表达质粒
Ｒta ， pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen ， pHAGE-Ｒta 。
中扩增出 基因 插入 中 构建重组慢病毒载体 将重组慢病毒骨架质粒
pHAGE-Ｒta psPAX2 pMD2． G 293 T ，
与包装质粒 和包膜质粒 共转染 细胞 通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的
293 T 。 ， 。 (MOI) Lentivirus-Ｒta
细胞占总数的百分比 收集病毒悬液 采用梯度稀释法测定病毒滴度 以不同感染复数 的
BCBL-1 ，72 h Ｒta ， KSHV
病毒量感染 细胞 后检测 基因的表达 同时通过蛋白质印迹和病毒颗粒释放实验检测 裂解期
-6 (vIL-6) 。 : pcDNA3． 1-Ｒta Ｒta
蛋白病毒白细胞介素 的表达及子代病毒颗粒的产出 结果 从真核表达质粒 中扩增出
， pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen ， pHAGE-Ｒta 。
基因 插入
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