转染Smad3基因大鼠肾系膜细胞uPA及PAI1表达改变.docVIP

转染Smad3基因大鼠肾系膜细胞uPA及PAI1表达改变 　【摘要】 通过对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）转染Smad3基因，观察转染阳性细胞克隆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)表达的改变，以进一步阐明转移生长因子β（TGFβ）介导肾小球硬化发生的作用机制。方法： 经脂质体介导将含有Smad3重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及RTPCR，Western blot法鉴定；又分别采用RTPCR与Western blot法，检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI1表达改变。 结果： 成功建立高表达Smad3的阳性MsC克隆（Th8，Th15），并证实其uPA mRNA及蛋白表达明显降低，而PAI1 mRNA及其蛋白的表达显著增加。结论： TGFβ可能通过上调Smad3而减少组织内uPA的生成和增加PAI1的合成，从而促进肾小球硬化的进展。 【关键词】 系膜细胞 Smad3 尿激酶型纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制因子1 ［Abstract］ Objective: To elucidate the mechanism of the role of TGFβ in the development of glomerulosclerosis by observing urokinasetype plasminogen activator(uPA)and plasminogen activator inhibitor1(PAI1)expressions on cultured rat mesangial cells(MsC)transfected with Smad3 cDNA. Methods： Lipofectin method was used to transfect Smad3 cDNA into rat MsC, RTPCR and Western blot analysis for detecting Smad3 mRNA and protein expression level.The expressions of uPA and PAI1 were also determined by RTPCR and Western blot. Results： Overexpression of Smad3 on two transfected MsC clones (Th8，Th15)were successfully established.Two MsC clones showed decreased expressions of uPA mRNA and its protein accompanied with increased synthesis of PAI1 mRNA and its protein. Conclusion： It is possible that TGFβ mediates the development of glomerulosclerosis by upregulating Smad3 expression, which decreasing the expression of uPA and increasing the synthesis of PAI1. ［Key words］ mesangial cell; Smad3; urokinasetype plasminogen activator plasminogen activator inhibitor1 大量研究表明，转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGFβ）的作用是介导肾小球硬化发生的共同通路［1］。TGFβ通过与靶细胞膜上的相关受体（TβR）结合，磷酸化激活信号转导分子Smad2和Smad3后与Smad4形成异聚体转移至核内，并在核内相关因子的共同作用下，参与对一些靶基因表达的调节［2］。体外培养的肾小球系膜细胞（mesangial cell,MsC）有Smad2，Smad3和Smad4存在，可被TGFβ1激活并参与纤溶酶原激活物抑制因子1（plasminogen activator inhibitor1，PAI1）及Ⅰ型胶原的转录过程［3,4］。最近我们运用细胞转基因技术发现Smad7介导了肾小球MsC基质降解酶系统代谢过程，且其可能为阻止肾小球硬化发生的重要机制［5］。本实验将Smad3 cDNA重组质粒经脂质体介导转染大鼠MsC，观察转基因MsC克隆尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinasetype plasminogen acti