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辛伐他汀对大鼠股骨骨折愈合影响 　 作者：梁春雨，张柳，赵文国，程爱国，王丽娜 【关键词】 辛伐 　　【关键词】 大鼠；骨密度；骨组织形态计量学；骨折愈合；他汀类药物 　　0引言 　　他汀类药物是目前临床用于降低胆固醇、预防心血管疾病的常用药物，其作用机制是抑制羟甲基戊二酰辅酶A还原酶，从而降低肝脏胆固醇的合成. Mundy等［1］的研究第一次表明，他汀类药物具有激活成骨细胞、促进骨合成代谢作用，这一发现为临床治疗骨质疏松和骨折愈合提供了新的思路，成为目前对于研究骨代谢新药的一个热点问题. 为了进一步探讨该药物的成骨作用及其机制，我们通过建立大鼠骨折模型［2］的方法，进行了该药物对大鼠骨折愈合影响的初步实验研究. 　　1材料和方法 　　1.1动物模型制备与分组健康12周龄雌性SD大鼠20只，体质量(238±22) g. 以10 g/L戊巴比妥钠按40 mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后，将大鼠仰卧于手术台上，常规去毛、备皮、碘伏消毒，于右大腿中段外侧取纵形皮肤切口，长约2 cm，沿股外侧肌间隙钝性分离进入达股骨干，固定股骨，在骨干中1/3段用线锯锯断成横行骨折，此过程中注意保护坐骨神经和肌肉组织，然后，以直径约1.5 mm的克氏针逆行穿入骨折近端且从后侧股骨大粗隆穿出，复位骨折后再将其顺行穿入骨折远段髓腔，生理盐水冲洗，逐层关闭伤口. 然后，将动物随机分成两组（每组10只）：给药组（Fracture+Simvastatin）以5 mg/kg隔日灌胃给辛伐他汀药物一次；对照组（Fracture+Vehicle）以同样方法给与等量的生理盐水. 所有的受试大鼠在术后6 wk处死，并且处死前第10日和第4日分别皮下注射盐酸四环素和钙黄绿素行双荧光标记，处死后的大鼠取右侧股骨标本. 　　1.2观察指标 　　1.2.1CR摄片将大鼠完整右侧股骨干骨折标本经计算机X线摄相仪（CR）摄片（距离：90 cm、电压：40 KV、电流：3.2 mA#12539;s），观察大鼠股骨骨折骨痂的连续性和测量骨痂最大直径. 　　1.2.2密度测定应用NorlandXR36双能X线骨密度测量仪（DEXA，美国），采用小物体扫描模式，准确度0.01%，扫描速度60 mm/s,分辨率（resolution） 1.0 mm×1.0 mm，扫描宽度5.0 cm的参数值，进行右侧股骨中1／3段（骨痂）骨密度的测量. 测量时，将固定骨折部位的克氏针拔除，其范围包含了以每个骨折部位为中心的无克氏针矩形区域，即：感性趣区. 　　为了评价精确度，随机选取一例，在位置不变的情况下，连续测量BMD各5次，精确度用变异系数CV表示（CV＝5%）. 　　1.2.3形态学染色将骨折骨痂标本，置入40 g/L多聚甲醛和0.6 mol/L戊二醛混合缓冲固定液中（pH=7.2～7.4），在4℃条件下固定24～48 h，再经0.3 mol/L EDTA2Na缓冲液（pH=7.4，4℃）脱钙，隔5～7 h更换脱钙液，经过3～5 wk后，经鉴定，脱钙完全. 然后,梯度乙醇脱水, 二甲苯透明，纵向石蜡包埋, 5 μm连续切片，HE染色，透明后中性树胶封片，Olympus显微镜下作普通光镜观察. 　　1.2.4骨组织形态计量学测定将骨痂标本固定后逐级脱水，浸入3∶7的甲基丙烯酸甲酯中24 h［真空负压651.88 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa),1次］，然后以半聚合甲基丙烯酸甲酯包埋制成实验标本. 采用Jung K硬组织切片机，每个标本连续切6张10 μm和4张5 μm厚的不脱钙骨切片，其中5 μm薄片采用甲苯胺蓝染色用于普通光学显微镜下观察和测量，10 μm厚片用于荧光显微镜下观察测量. 　　统计学处理： 实验数据建立EXCEL数据库，资料用SPSS 11.0来处理，采用成组t检验. 数据用x±s表示，以P＜0.05表示具有统计学意义. 　　2结果 　　2.1CR摄片观察观察大鼠离体右侧股骨干CR片发现，对照组和给药组大鼠骨折端均有连续性骨痂包绕，骨折线模糊或消失，骨痂量没有明显的差别，未发现内固定克氏针松动现象，但是，给药组有3只股骨干的骨折骨痂塑形明显好于对照组；测量所得两组骨痂最大直径宽度，对照组：（4.35±0.48）mm，给药组：（4.43±0.39）mm，经统计学分析差异无显著性（P＞0.05）. 2.2骨密度测量骨痂骨密度测量结果(g/cm2)显示，对照组：0.1208±0.0101，给药组：0.1292±0.0075，经统计学分析差异有显著性（P＜0.05）. 　　2.3组织学观察给药组与对照组比较骨痂中均主要以骨性骨痂为主，软骨骨痂少见或基本消失，小梁骨成熟度较高，成骨细胞功能活跃，破骨细胞少见，不典型，骨小梁粗细均匀一致，间距无明显增宽，二者比较无明显的组织形态学