金钗石斛遗传多样性探究随机扩增多态DNA-PCR反应体系建立及.docVIP

金钗石斛遗传多样性探究随机扩增多态DNA-PCR反应体系建立及 　 作者：王燕燕 徐红 魏丹红 王峥涛 【摘要】 目的对影响金钗石斛随机扩增多态DNA（RAPD）-PCR扩增效果的一些因素进行优化，为进一步研究其遗传多样性奠定基础。方法对金钗石斛RAPD分析中一些重要影响因素进行比较系统的构建和优化，建立金钗石斛RAPD稳定可靠的反应体系。结果金钗石斛较适宜的RAPD-PCR反应条件为：10μl PCR反应体系中，5～20 ng 模板DNA，3.0 mmol·L-1Mg2+，0.34 mmol·L-1dNTPs，0.6 U Taq DNA聚合酶，1.5 μmol·L-1引物，较适宜的退火温度为36 ℃。结论所建立的金钗石斛RAPD反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强等特点，可用于金钗石斛的遗传多样性研究。以该优化的RAPD条件进行重复性实验，其实验结果重复性良好。 【关键词】 金钗石斛； 随机扩增多态DNA反应体系； 优化 　　Abstract：ObjectiveTo establish and optimize RAPDPCR system of D. nobile Lindl.MethodsThe reliable RAPD-PCR system for the genetic diversity study of D. nobile Lindl. established by systematically testing and optimizing the important concentrations of the factors. ResultsThe conditions that were suitable for RAPD-PCR of D. nobile Lindl. were as follows: 10 μl PCR reaction system contained 5～20 ng template DNA, 3.0 mmol·L-1Mg2+, 0.34 mmol·L-1 dNTPs, 0.6 U Taq DNA polymerase and 1.5μmol·L-1prime. The suitable annealing temperature in the RAPD-PCR reaction system was 36 ℃. ConclusionThe RAPD-PCR system, which was established in this paper for studying D. nobile Lindl., can provide clear, reliable, abundant polymorphic molecular markers,stable reaction system, and is suitable for studying the genetic diversity of D. nobile Lindl.. The experiment results are reproducible based on this conditions. 　　Key words：D. nobile Lindl.; RAPD reaction system; Optimization 　　金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.又称金钗石、扁金钗、扁黄草、扁草、黄草，为兰科(Orchidaceae)石斛属Dendrobium Sw.植物，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳的功效，是中药石斛的主要来源之一。《本草纲目》中记载：金钗石斛可“强阴益精，厚肠胃，壮筋骨，暖水脏，补肾益力，轻身延年”等，是药用范围较广的名贵中药；又由于其花型奇特、花色艳丽，而具有较高的观赏价值［1］。近年来，我国学者对金钗石斛的生物学特性、药用价值、人工栽培、化学成分、药理、毒理等方面进行了较为广泛的研究［1～3］，而有关遗传多样性方面研究甚少。 　　随机扩增多态DNA（Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)技术是由Williams等于1990年创立的一种DNA分子标记方法，它可直接反映染色体组DNA多态性，能从遗传本质上揭示品种间多态性及亲缘关系，不受环境限制，具有操作简单快捷、成本低、通用性好、灵敏度高且不需预先了解基因组的相关分子生物学信息等优点［4,5］，被广泛应用于种质资源分析、生物种群划分、遗传相关分析、遗传图谱构建、基因定位等方面［6］。 　　本实验就模板浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度等影响RAPD反应的诸因素进行了构建和优化，建立多态性强、稳定性好的金钗石斛RAPD反应