霉茶缓释片高效液相色谱指纹图谱探究.docVIP

霉茶缓释片高效液相色谱指纹图谱探究 　 作者：王桂红，吴杰，聂华，乔明，郑国华 【摘要】 　　目的建立霉茶缓释片的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，更有效地监控其质量。方法采用梯度洗脱法,对霉茶缓释片进行HPLC测定, 检测波长292 nm，流动相为乙腈-0.2%磷酸线性梯度洗脱对霉茶缓释片中总黄酮进行指纹图谱测定。采用中国药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本: 2004A)进行比较计算。结果通过软件的比较,霉茶缓释片的指纹图谱相似度均大于0.90，建立霉茶缓释片中总黄酮的共有指纹图谱。结论所建立的方法可作为霉茶缓释片的指纹图谱，有助于霉茶缓释片的质量控制。 【关键词】 霉茶缓释片 霉茶 大叶蛇葡萄 高效液相色谱 指纹图谱 　　霉茶为葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄A.megalophylla Diels et. Gilg的枝叶加工而成，主要分布于湖北、陕西、四川等地。在湖北恩施地区，民间将其叶置沸水中稍烫，沥干，摊放通风处至表面上有白霉，泡茶服，称为霉茶［1］。霉茶缓释片主要是以霉茶总黄酮提取物为原料制成的缓释片。霉茶中主要有效部位为总黄酮，经药理实验表明，霉茶总黄酮提取物可明显降低糖尿病家兔的血糖，减轻其肾组织的损害，显著抑制NOS的活性，稳定血清NO的含量，表明霉茶总黄酮对T2DM有一定的治疗作用［2］。现代药理研究其同属植物广西藤茶总黄酮提取物,具有降血糖、抗炎、镇痛和增强免疫作用［3］。本研究建立了HPLC 对霉茶缓释片进行指纹图谱的测定方法,建立霉茶缓释片的总黄酮的共有指纹图谱，为霉茶缓释片质量控制提供科学依据。 　　1 仪器与试药 　　戴安P680高效液相色谱仪（四元泵、紫外检测器及配套色谱工作站）; SC-101型鼓风电热恒温干燥箱(上海市仪器试验总厂); Mettler-Toledo AG285型分析天平（Mettler-ToledoGmbH，Laboratory Weighing Technologies，Soitzerland）；DZHW型调温电热套（北京市永光明医疗仪器厂）；HH-4型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；KQ3200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；蛇葡萄素，杨梅素，槲皮素对照品（为自制，从霉茶中提取分离得到，经UV、MS、1HNMR、IR光谱分析鉴定结构，并经HPLC法检测，含量在98%以上）;其余均为分析纯，蒸馏水为自制。霉茶均采自于湖北省恩施州来凤县，经我院鉴定教研室鉴定为Ampelopsis megalophylla Diels et. Gilg。自制10批霉茶缓释片。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件 　　Aichrom Bond-AQ C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）; 流动相为乙腈-0.2%磷酸水，按表1的条件进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min；柱温：25℃；检测波长：292 nm；进样量5 μl。 　　2.2 供试品溶液的制备取霉茶缓释片20片，研细，取约2.00 g粉末，精密称定后，置索氏提取器中，加甲醇80 ml，回流至提取液无AlCl3显色反应，提取液甲醇定容于100 ml，经0.45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液。表1 流动相梯度（略） 　　2.3 对照品溶液的制备 　　分别取蛇葡萄素、槲皮素、杨梅素对照品适量，置10 ml量瓶中，加入适量甲醇，超声溶解，经0.45 μm滤膜过滤，即得对照品溶液。 　　2.4 稳定性及精密度考察 　　取第3批霉茶缓释片，按照供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，连续进样5次，测定以11号峰杨梅素为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果,峰号1～11相对保留时间的RSD(%)分别为0.892，0.544，0.211，0224，0.127，0.131，0.129，0.146，0.066，0.097，0；相对峰面的RSD(%)分别为1.895，2.134，2.212，1.973，0.584，2.573，1.992，0.822，1.736，2.325，0，在24h之内基本稳定。 　　　2.5 重复性实验 　　取第8批霉茶缓释片5份，分别按照供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别进样测定。结果,峰号1～11相对保留时间的RSD(%)分别为1.345，1.085，0.433，0.374，0.135，0.191，0.218，0.163，0.184，0.212，0；相对峰面的RSD(%)分别为2.337，2.501，2.234，2.311，0.530，2.878，2.809，2.645，1.905，2.165，0。 　　2.6 霉茶总黄酮提取物HPLC指纹图谱及其技术参数 　　2.6.1 霉茶缓释片HPLC指纹图谱建立及分析见图1。 　　2.6.2 共有指纹峰的标定采用中国药典