MTT比色法检测苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生影响.doc

MTT比色法检测苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生影响 　【摘要】 目的 研究苦杏仁甙(Amygdalin)对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响。方法 取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞，培养24h后，加入不同浓度的苦杏仁甙(4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L)作用24h后，采用MTT法观察苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生的影响。结果 苦杏仁甙随着浓度的增加，兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用逐渐增强。结论 苦杏仁甙能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生，其抑制作用在一定浓度范围内有剂量依赖性。 【关键词】 苦杏仁甙;兔晶状体上皮细胞;后囊浑浊;MTT比色法 　　[Abstract] Objective To study the effects of Amygdalin on the proliferation of rabbit lens epithelial cells(RLECs)in vitro.Methods RLECs were primary cultured.After the second generation of RLECs were incubated for 24 hours，we added different concentraions of Amygdalin for 24 hours.The cell proliferation of RLECs was determined by MTT assay.Results The inhibitory rates of RLECs proliferation were increased in dose.dependent ways by Amygdalin in vitro.Conclusion Amygdalin could effectively inhibit the proliferation of RLECs，and it might have broad prospects in the prevention of posterior capsular opacification. 　　[Key words] amygdalin;rabbit lens epithelial cells;posterior apsular opacification;MTT assay 　　后囊浑浊(posterior capsular opacification，PCO)是现代白内障囊外摘出人工晶状体植入术后最常见的并发症。后囊混浊的发生主要由于术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial　cells，LECs)发生增生及后囊的纤维化有关。其发生率往往与年龄相关，年龄越轻，发生率越高。在成人，术后发生率为30%～50%，在儿童则为100%。因此，如何有效地抑制晶状体上皮细胞增生对于PCO的防治具有重要意义。苦杏仁甙(Amygdalin)是中药桃仁的主要成分，是一种能生氰(cyanogensic)的化合物。存在于水果果核和坚果中。有研究表明它能有效抑制纤维母细胞增生[1]，而且可以明显地抑制组织的纤维化[2]。这里我们采用MTT比色法研究其对体外培养的兔晶状体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells，RLECs)增生的影响，为进一步探索其作用机制提供理论依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 试剂与仪器 主要试剂苦参碱购自西安天丰生物科技有限公司;胰蛋白酶、小牛血清、DMEM干粉培养基、噻唑蓝、二甲基亚砜。二氧化碳培养箱、倒置相差显微镜、超净工作台、自动酶标读数仪(E2500型，美国BioRad)。 　　1.2 细胞培养方法 健康雄性新西兰大白兔5只，体重1.4～1.6kg，以空气栓塞法处死。立即取出眼球置于1∶8000的庆大霉素生理盐水中，无菌手术台上将其晶状体取出。在手术显微镜下，剥离晶状体囊膜，剪为大小约1mm2的小块，均匀平贴于培养皿中，间隔3～5mm。放置2～3h待囊贴牢后后，加入含20%小牛血清的DMEM培养基至刚好浸没囊膜，置入二氧化碳培养箱培养。3～5天换液1次，待细胞长满后，用0.25%胰蛋白酶消化。按1∶2的比例接种到培养瓶中。倒置显微镜下动态观察细胞生长情况，取第2代细胞进行实验。 　　1.3 细胞处理 取第2代RLECs，用胰酶消化并调整细胞浓度为5×104个/ml，接种于96孔培养板，每孔200μl。置入二氧化碳培养箱，培养24h静待细胞贴壁;加入1g/L苦杏仁甙PBS溶液并调整浓度为4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L，空白对照组则加入等量的PBS溶液，培养24h后，每孔加入MTT(5mg/L)溶液20μl，继续培养4h后中止培养，吸去孔内