Muc1 mRNA及CD44 mRNA在非小细胞肺癌组织中表达及及预后关.doc

Muc1 mRNA及CD44 mRNA在非小细胞肺癌组织中表达及及预后关 　 作者：吴勇 李光虎 刘国津 尹光浩 刘伟 【摘要】 目的 探讨Muc1 mRNA和CD44 mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况与淋巴结转移的相关性及其与预后的关系。方法 应用RTPCR方法检测36例NSCLC组织中和10例正常肺组织中Muc1 mRNA和CD44 mRNA的表达情况。结果 ① 36例NSCLC组织中有19例Muc1 mRNA阳性表达,阳性表达率为52.7%；21例CD44 mRNA表达，阳性表达率为58.3%。②Muc1 mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2 =10.166,Ｐ＜0.05)；CD44 mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2=8.371,Ｐ＜0.05)。③Muc1 mRNA和 CD44 mRNA阳性表达与NSCLC患者的预后有关(Ｐ＜0.05)。④Muc1 mRNA和CD44 mRNA在NSCLC组织中表达成正相关(r=0.442,Ｐ＜0.05)。结论 Muc1 mRNA和 CD44 mRNA阳性表达的NSCLC患者淋巴结转移率高，对NSCLC患者预后判断具有一定的指导作用。 【关键词】 Muc1；CD44；非小细胞肺癌；预后 Muc1黏蛋白是一种高分子量糖蛋白，在上皮细胞来源的恶性肿瘤中有异常表达，在肿瘤的生长、侵润、发展及转移中有重要作用〔1〕。CD44蛋白是一种细胞膜表面跨膜糖蛋白，又称透明质酸受体，在许多人类肿瘤中均有过量表达，与肿瘤的发生、发展密切相关〔2〕。目前国内Muc1 mRNA和CD44 mRNA联合检测在肺癌中的研究尚无报道。本实验采用RTPCR方法,检测非小细胞肺癌(NSCLC)手术切除标本和正常肺组织中Muc1 mRNA和CD44 mRNA的表达,分析Muc1 mRNA与CD44 mRNA与肺癌淋巴结转移的相关性,探讨其对于临床肺癌判断预后的价值。 1 材料与方法 1.1 标本来源 我科2002年1月1日至2003年7月30日手术切除的NSCLC冰冻标本36例，术前均未行放疗及化疗。男性28例，女性8例。年龄43～73岁，中位年龄63.5岁，其中腺癌19例,鳞癌13例,鳞腺癌4例。选择正常肺组织(远离癌组织) 10例作为阴性对照。淋巴结转移、组织学类型、肿瘤大小均依据术后病理回报，TNM分期依据1997年国际抗癌联盟新修订的肺癌TNM分期。 1.2 主要试剂 RNA提取试剂盒、逆转录酶购于Gibco BRL公司;脱氧核糖核酸酶、TaqDNA聚合酶、dNTP和DNA Ladder Marker购于Promega公司。 1.3 取材方法 36例NSCLC患者手术切除肺癌组织及10例阴性对照正常肺组织，用锡箔纸包裹标号，投入液氮中1 min速冻，然后放置于-80℃冰箱内保存。 1.4 RTPCR法灵敏度实验 分别将正常肺组织100 ng与3 ml DEPC处理水混合后匀浆,用FicollHypaque分离液密度梯度离心。镜下细胞记数,将其调整为数量级为107的细胞悬液各10份,将肺癌细胞(LC5细胞株)连续稀释为以下各数量级的细胞悬液:105、104、103、102、10、1、1、1、1、1。将以上2类细胞悬液分别混合制成代表不同浓度的混合液,分别提取RNA,进行RTPCR扩增并作琼脂糖凝胶电泳分析。 1.5 Muc1 mRNA和CD44 mRNA表达半定量实验 将观察组36例肺癌组织匀浆,取细胞,调整为数量级107的细胞悬液,每份样品连续稀释为以下各数量级的细胞悬液:105、104、103、102。分别提取RNA,进行RTPCR扩增并作琼脂糖凝胶电泳分析。 1.6 总ＲＮＡ的提取 按Chomczynski一步法提取每例肺癌冰冻组织的总RNA，紫外分光光度计测量，判定所提取RNA的纯度，要求光密度值A260/A280＞1.7。将RNA溶液置-80℃冰箱保存。取2 μl RNA溶液于2%琼脂糖凝胶进行电泳。阴性对照肺组织ＲＮＡ的提取步骤同上述冰冻组织RNA的提取。 1.7 引物 Muc1 mRNA和CD44 mRNA引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。根据Noguchi的基因序列设计Muc1 引物序列:正义5′CGTCGTGGACATTGATGGTAC3′，反义5′GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA3′，扩增片段为524 bp。根据choi的基因序列设计CD44引物序列：正义5′ACAACTGGTGATGGAG