三七总皂苷对子宫内膜异位症内膜VEGF及其受体KDR表达影响.docVIP

三七总皂苷对子宫内膜异位症内膜VEGF及其受体KDR表达影响 　 【关键词】 子宫内膜异位症 血管内皮生长因子 受体 三七总皂苷注射液 0引言子宫内膜异位症(endometriosis, EM)是一种常见的妇科良性疾病，其发病机制尚未明了. 但是当脱落的子宫内膜附着在腹膜或其他部位时，新的血供的建立和维持是子宫内膜异位种植存活和发展的基本条件. 血管生成不仅在正常子宫内膜的生长修复中起作用，而且在子宫内膜异位症的发生发展中占有重要的位置. 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是重要的血管生成因子，可直接而特异地作用于血管内皮细胞，导致新生血管形成. 三七是五加科人参属植物，传统用于止血化瘀和消肿镇痛，其主要有效成分为三七总皂苷. 我们应用三七总皂苷治疗子宫内膜异位症如下. 1对象和方法 1.1对象200601/200709我院确诊为EM的患者80例，同期门诊体检健康妇女40人为对照组(非月经期、非孕期)，均无免疫性疾病，两组对象均未用激素类药物及其他药物和手术，无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，肝、肾功能试验正常. 1.2方法三七总皂苷注射液（血塞通，济南海泰医药科技有限公司生产），鼠抗人KDR购自美国Santa Cruz公司，免疫组化用SP试剂盒购自深圳晶美生物制品有限公司，DAB购自美国Sigma公司. PCR仪购自武汉博士德生物公司采用同济千屏影像公司提供的HPIAS1000彩色图像分析系统对VEGFKDR免疫组化标本进行分析处理. 三七总皂苷注射液250 mL（含三七总皂苷0.2 g），静滴，1次/d，疗程3 mo. 患者治疗前及治疗后1，3 mo均在月经干净的3～7 d内取子宫内膜组织1次、正常对照组取1次，用半定量RTPCR检测VEGF mRNA的表达，用免疫组化SP法检测该受体KDR的表达. 疗效判定标准：痊愈：症状全部消失，盆腔包块等局部体征基本消失，不孕症患者在治疗及停药3 mo内妊娠；显效：症状基本消失、盆腔包块缩小，不孕症患者得以受孕；有效：症状减轻，盆腔包块无变化，停药3 mo症状不加重；无效：主要症状无变化或恶化，局部病变加重. 常规用碘伏消毒阴道、宫颈，将顶端带有内膜采集器的内芯连同外套管顺应子宫纵轴方向置入宫底，后退套管约2 cm，伸出内膜采集器，在相同部位顺时针旋转1 wk刮取内膜后退入套管内与套管一并撤出. 将刮取获得的子宫内膜组织用生理盐水冲洗、滤纸吸干水分、分为2份，称质量后置入甲醛浸泡，置-70℃液氮罐中冻存各1份，待统一检测. 1.2.1VEGF mRNA受体的检测取50～100 mg组织以Trizol试剂提取RNA，具体操作按试剂盒说明进行，提取后以紫外光分光光度计测定其纯度并定量，在甲醛变性凝胶上电泳验证RNA完整性. 半定量RTPCR采用厂家推荐步骤进行，以GAPDH扩增产物为内参照. 引物序列参照文献设计，RTPCR反应体系及反应条件参照文献并稍加优化，VEGF165引物序列:上游5′CAGGCTGCTGTAACGATGAA3′，下游5′AAATGCTTTCTCCGCTCTGA3′，扩增产物为280 bp；βactin引物序列:上游5′AGCCATGTACGTAGCCATCC3′，下游5′CTCTCAGCTGTGGTGGTGAA3′，反应总体积50 μL，扩增产物为208 bp. PCR反应条件:94℃预变性2 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸90 s，持续35个循环. PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后进行吸光度扫描，将VEGF mRNA扩增条带的光密度值与βactin的吸光度值之比作为衡量参数，分析VEGF mRNA的表达. 1.2.2VEGF受体(KDR)蛋白表达的检测KDR抗体稀释浓度为1∶100，DAB显色，测定细胞内阳性的平均吸光度值，结果判定，每张切片随机选取3～5个视野(200倍)，细胞内不着色的为阴性细胞，细胞质内有棕黄色反应物，染色明显高于背景者为阳性细胞. 统计学处理：所有数据用SPSS13.0统计软件处理，自身对照数据采用配对样本的t检验，组间数据比较采用两样本均数比较t检验. 2结果 EM患者80例经三七总皂苷治疗3 mo后，痊愈50例（62.5%）；显效15例（16.8%）；有效5例（7.3%）；无效10例（12.5%），总有效率为87.5%. 副作用：治疗期间，10例15 d 后出现头晕，不欲饮食，5 d后症状缓解. 与对照组相比，EM患者VEGF mRNA,VEGF受体KDR表达均升高，差异均有统计学意义(Plt;0.01，表1）. 用三七总皂苷治疗治疗1 mo和3 mo后，子宫内膜VEGF mRNA，VEGF受体KD