丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾NFκB、TNFα表达影响.docVIP

丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾NFκB、TNFα表达影响 　【摘要】 目的 研究丙泊酚对大鼠肢体缺血再灌注损伤后肾组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα，TNFα)、核因子κB(nuclear factorκB，NFκB)表达的影响。方法 24只SD雄性大鼠，随机分为假手术对照组(A组)，肢体缺血再灌注组(B组)和丙泊酚干预组(C组)，每组8只。采用免疫组织化学方法检测TNFα、NFκB的表达，行图像分析半定量。结果 B组大鼠肾组织中TNFα、NFκB的表达明显高于A组(P＜0.05)，C组明显低于B组(P＜0.05)。结论 肢体缺血再灌注后有明显肾损伤，丙泊酚对肢体缺血再灌注肾损伤有一定程度的保护作用，其机制可能与下调大鼠肢体缺血再灌注损伤肾组织中TNFα、NFκB的过度表达有关。 　　 【关键词】 丙泊酚；肾；肢体缺血再灌注；肿瘤坏死因子α；核因子κB 　　肢体缺血再灌注损伤是外科常见的病理生理过程，如止血带使用时间过长、创伤、断指再植、血栓再通等都可以引起肢体缺血再灌注损伤。肢体缺血再灌注除了能引起相应的肢体损伤，还可以通过神经内分泌免疫机制引发远隔脏器障碍及损伤。肢体缺血再灌注对相应肢体损伤的研究已较成熟，但对于肢体缺血再灌注引起的远隔脏器肾损伤的研究却较少见。本研究拟观察大鼠肢体缺血再灌注后肾组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα，TNFα)、核因子κB(nuclear factorκB，NFκB)的变化以及丙泊酚对其损伤的干预。 　　1 资料与方法 　　1.1 动物模型制备 实验前禁食12 h，自由饮水，25％乌拉坦(1 g/kg)腹腔注射，麻醉后气管切开，接动物呼吸机机械通气(通气频率为75次/min，潮气量为8 mL，吸呼比为1∶2)，于腹股沟处解剖出双侧股动脉，用无创动脉夹夹闭，远端股动脉置管测压，血压为零标志缺血成功，保持下肢缺血3 h后去除动脉夹再灌注4 h，恢复下肢血供，血压升高标志再灌注成功。 　　1.2 分组及处理 24只清洁级SD雄性大鼠(山西医科大学动物中心提供)，体重(200±20) g，随即分为三组，每组8只。假手术对照组(A组)：大鼠麻醉后仅分离不夹闭股动脉；肢体缺血再灌注组(B组)：夹闭股动脉缺血3 h，再灌注4 h；丙泊酚干预组(C组)：夹闭股动脉前10 min静脉注射丙泊酚5 mg/kg(AstraZeneca公司，英国)，随后以10 mg/kg·h静脉输注，缺血再灌注同B组。再灌注完毕，实验动物经心脏主动脉插管灌注固定液〔4％多聚甲醛0.1 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer solution，PBS)配制〕后，处死大鼠取肾，置于10％甲醛溶液中固定24 h后常规石蜡包埋并切片，以备组织学检查。 　　1.3 肾组织TNFα、NFκB的检测 选用链酶亲和素过氧化物酶复合物即用型免疫组化试剂盒(武汉博士德)，按说明书操作，取石蜡片按程序脱蜡，3％H2O2灭活内源性酶，微波抗原修复10 min，5％牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)封闭，分别加免抗TNFα多克隆抗体(武汉博士德)I抗、免抗NFκBp65多克隆抗体(武汉博士德)I抗，稀释度为1∶80，冰箱过夜后加山羊抗鼠免疫球蛋白G，加酶标记物，DAB显色，光镜下观察。应用Laica图像分析系统，光镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统。每张切片随机选取60个区域，计算每张切片的平均光度，阳性单位。 　　1.4 统计分析 计量数据以(±s)表示，统计分析采用SPSS12.0行方差分析和q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 　　　2 结 果 　　2.1 肾组织病理学观察 光镜下，A组无明显病理学改变，B组可见肾小球肿大，球囊上皮细胞肿胀，囊壁水肿，囊腔变小。间质内少量中性白细胞浸润，血管内白细胞聚集，靠边。C组肿大肾小球明显减少，囊壁水肿亦减轻，囊腔较B组变大。A组肾组织有较少量的TNFα、NFκB的蛋白表达，B组肾组织中TNFα、NFκB的表达比A组显著上调(P＜0.05)，但C组大鼠肾组织中TNFα、NFκB表达明显低于B组(P＜0.05)(见表1)。光镜下观察各组蛋白表达变化，见图1～4。 　　表1 各组大鼠肾组织TNFα、NFκB的表达 (略) 　　图1 －　图4 略 　　3 讨 论 　　 　　缺血再灌注损伤是常见的病理生理过程，越来越受到重视和研究。肢体缺血再灌注损伤的机理极为复杂：无复流导致一系列细胞结构、功能障碍；钙超载导致离子交换变化，能量代谢障碍；中性粒细胞活化引发“呼吸爆发”，产生并释放大量自由基和一些促炎症细胞因子，如NFκB、TNF