夏膝颗粒对自发性高血压大鼠心肌TGFβ1表达影响.docVIP

夏膝颗粒对自发性高血压大鼠心肌TGFβ1表达影响 　【摘要】 目的 探讨夏膝颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)心肌转化生长因子（TGFβ1）表达的影响及意义。方法 50只12周龄雄性SHR随机分为5组：SHR空白组、阳性药组、夏膝颗粒高、中、低剂量组各10只，分别予以缬沙坦和不同剂量的夏膝颗粒灌胃；同时选取8只同周龄的雄性WistarKyoto大鼠(WKY)作为对照。给药8 w后采用RTPCR法检测心肌TGFβ1 mRNA水平。 结果 与WKY对照组比较，SHR空白组心肌TGFβ1/βactin吸光值之比显著升高（P＜0.01）；与SHR空白组比较，夏膝颗粒高剂量组能显著降低SHR TGFβ1 mRNA的表达（P＜0.01），甚至低于WKY组(P＜0.05)。结论 夏膝颗粒可能通过下调心肌TGFβ1的高表达，抑制心肌细胞外基质的增生,防止心室重构。 【关键词】 夏膝颗粒；自发性高血压大鼠；心肌转化生长因子 近年研究发现在高血压心室重构的形成过程中心肌转化生长因子(TGFβ1)参与了多种心脏的生理和病理过程，并在其发生发展中具有重要作用〔1〕。研究认为心肌细胞和心肌成纤维细胞(FBC)均有TGFβ1的表达，TGFβ1是胶原纤维和其他细胞外成分合成和沉积的强有力的始动因子，可刺激FBC大量增生及胶原、纤黏连蛋白基因的转录，同时对新合成基质的降解有明显阻抑作用〔2〕。目前，中医药治疗高血压尤其对自发性高血压大鼠(SHR)心肌TGFβ1表达影响方面的报道较少，故本研究探讨了夏膝颗粒对SHR心肌TGFβ1表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物分组 　　12周龄SHR 50只,雄性,体重(200±20)g,同源性WKY大鼠8只，由北京维通利华公司提供。按体重用随机数字表法将50只SHR大鼠随机分成空白组、阳性药组、夏膝颗粒高、中、低剂量组,每组10只。 　　1.2 药物制备及给药方法 　　夏膝颗粒(夏枯草、牛膝、茺蔚子3味,通化华夏药业有限公司提供)，缬沙坦(北京诺华制药有限公司提供)批号:X0355。实验时5组动物每天按下列剂量灌胃给药1次：夏膝颗粒高剂量组9 g·kg-1·d-1，夏膝颗粒中剂量组6 g·kg-1·d-1,夏膝颗粒低剂量组3 g·kg-1·d-1，阳性药组按0.013 g·kg-1·d-1给予缬沙坦水溶液；空白组给同体积生理盐水。连续用药8 w。 　　1.3 逆转录聚合酶链反应(RTPCR) 测定心肌TGFβ1 mRNA的表达 　　TGFβ1 mRNA按照Trizol法提取总RNA，按照MMuLV逆转录酶说明书反转录成cDNA。以肌动蛋白(βactin)为内参照。受体引物序列根据国际互联网cDNA文库检索的原始序列参照文献设计，引物均由上海生工公司合成。TGFβ1 引物序列:上游引物5′GCTAATGGTGGACCGCAAC3′；下游引物5′GCAGTGAGCACTGAAG3′，产物340 bp。βactin引物序列:上游引物5′TTGTCCCTGTATGCCTCTGGTC3′；下游引物5′GCTCATAGCTCTTCTCCAGGGAG3′,产物307 bp。PCR反应条件：94℃变性5 min，94℃变性30 s→60℃退火30 s→72℃延伸1 min，共循环30次，72℃延伸10 min。PCR产物电泳：2%琼脂糖凝胶电泳，DelDoc2000凝胶扫描仪扫描后，以TGFβ1/βactin的吸光值之比进行半定量分析，结果以光密度值(OD)表示。 　　　1.4 统计学处理 　　采用SPSS13.0软件进行统计学分析,实验数据用x±s表示,组间数据比较用方差分析。 　　2 结 果 　　1.WKY对照组；2.SHR空白组；3.阳性药组；4.夏膝高剂量组；5.夏膝中剂量组；6.夏膝低剂量组各组DelDoc2000凝胶扫描仪扫描结果见图1，各组TGFβ1/βactin的吸光值之比结果见表1。与WKY对照组比较，SHR空白组心肌TGFβ1/βactin比值显著升高（P＜0.01），表明SHR空白组大鼠心肌TGFβ1 mRNA的表达增强；与SHR空白组比较，夏膝颗粒高剂量组能显著降低SHR TGFβ1 mRNA的表达（P＜0.01），甚至低于WKY组(P＜0.05)；阳性药组心肌TGFβ1 mRNA的表达显著降低（P＜0.01），但与WKY对照组比较无显著差异（P＞0.05） ；夏膝颗粒中剂量组TGFβ1 mRNA有降低趋势，但与SHR空白组比较无显著性差异（P＞0.05），与WKY对照组比较亦无显著性差异（P＞0.05）。表1 各组大鼠心肌组织TGFβ1 mRNA表达比较(略) 　　3 讨 论 心室重构是由于一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功