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大鼠甲状旁腺细胞体外培养及功能实验探究 　 作者：董建敏　夏永兴　杨春雷 【摘要】 目的： 探讨大鼠甲状旁腺细胞的培养方法及其分泌功能，为甲状旁腺细胞移植奠定实验基础。方法： 胶原酶和胰蛋白酶系列消化甲状旁腺后，进行细胞培养。透射电镜检查培养5 d的甲状旁腺细胞，对1、3、5、7 d的细胞培养液行甲状旁腺激素测定。结果： 培养5 d的甲状旁腺细胞具有丰富的粗面内质网、高尔基复合体、杆状的线粒体和分泌颗粒。甲状旁腺细胞经过培养后可以正常分泌甲状旁腺激素，以第5天为最佳。结论：培养5 d的甲状旁腺细胞仍保持原有的形态结构，分泌功能最强，可作为同种移植的最佳供体。 【关键词】 甲状旁腺·细胞培养·甲状旁腺激素 【ABSTRACT】 Objective: To investigate the culture technique and secretory function of parathyroid cells in rats in order to establish experimental basis of parathyroid cell transplantation. Methods: After parathyroid glands were digested by collagenase and trypsin, isolated parathyroid cells were cultured. The cells cultured for 5 days were observed by transmission electron microscopy. donor HLA class I antigens[J]. Science, 1991,252(5013):1700-1702. （收稿日期：2008-01-05） tively. Results: Parathyroid cells cultured for 5 days had abundant rough surfaced endoplasmic reticula、Golgi bodies、stab mitochondria and secretory granules. Cultured parathyroid cells could secrete parathyroid hormone normally, especially on the 5th day. Conclusion: Parathyroid cells cultured for 5 days still possess original morphologic structure and have maximum secreting function, so it is an optimal donor for transplantation. 【KEY WORDS】 Parathyroid gland·Cell culture ·Parathyroid hormoneParathyroid hormone obtained from the cell culture fluid on day 1，3，5 and 7 was measured respec　　甲状旁腺功能低下症（简称甲旁低）是甲状腺术后的严重并发症，极大地影响患者术后的生活质量。目前多采用维生素D和钙剂治疗，尚无有效的激素替代疗法［1］。为了达到钙、磷的生理调节，避免钙剂治疗所产生的副作用，甲状旁腺（parathyroid gland， PTG）移植已渐成为治疗甲旁低的主要手段［2］。本研究对PTG细胞的体外培养方法进行探讨，为PTG细胞移植奠定实验基础。 1　材料与方法 1.1　实验材料　2～3周龄Wistar大鼠18只，雄性，体质量25~50g，由哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心提供。主要试剂和仪器包括胶原酶V（Sigma公司）、胰蛋白酶（Sigma公司）、RPMI 1640培养液(Gibco公司)、甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)N-tact PTH IRMA 26100放免试剂盒 (美国DiaSorin公司)、JEM-1220透射电镜（日本JEOL公司）和CO2培养箱（德国Heraeus公司）。 1.2　实验方法 1.2.1　PTG切取与细胞培养　Wistar大鼠腹腔注射麻醉，无菌手术切取双侧PTG，经病理组织学检查证实。将组织置入4℃ RPMI 1640培养液中漂洗，吸除培养液，剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的碎块。加入2.5%的胶原酶在37℃恒温水浴中振荡消化10 min，然后用Hank’s液洗2遍，再以0.25%的胰蛋白酶消化5 min，RPMI