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己酮可可碱对大鼠心肌损伤保护作用 　 作者：徐志刚 陈立 王春梅 范 征 宋艳芳 王春艳 【摘要】 目的 探讨己酮可可碱(PTX)对心肌损伤的保护作用及机制。方法 建立心肌缺血再灌注(I/R)模型，采用Langendorff灌流装置。120只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组、I/R 5、10、20、30 min组，相应的PTX(100 μmol/L)治疗组，持续观察PTX对血流动力学指标的影响。ELISA法检测心肌组织中的肿瘤坏死因子α(TNFα)含量。 结果 缺血前及灌注期PTX 100 μmol/L给药能明显恢复大鼠I/R前后心脏的左室发展压(Plt;0.05)，左心室舒张末期压亦明显下降;100 μmol/L PTX治疗组在I/R 5 min时明显降低TNFα的含量(Plt;0.05)。结论 PTX提高大鼠缺血缺氧后心肌收缩力的恢复水平，增强心肌缺血缺氧的耐受性。改善心肌I/R引起的TNFα生成可能是其心肌保护作用的机制之一。 【关键词】 己酮可可碱;缺血再灌注;肿瘤坏死因子α 研究表明，己酮可可碱(pentoxifylline，PTX)具有保护心血管损伤、改善慢性心衰患者及特发性扩张型心肌病患者心功能的作用〔1〕，但其对心肌缺血再灌注(ischemiareperfusin,I/R)损伤的作用及其机制尚未见报道。本文旨在研究PTX对心肌损伤的保护作用及其机制，为PTX的临床应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料及动物 清洁级Wistar大鼠(吉20030001)，体重250～300 g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供;PTX购自Sigma公司，其他试剂均购自北京化学试剂厂;蠕动泵购自兰格恒流泵有限公司。 　　1.2 分组 120只健康雄性Wistar大鼠，随机分为12组，每组10只： (1)正常对照组：含氧灌流液灌流80 min;(2)缺血(I)组：灌流液预灌注20 min，停止灌注30 min;(3～6)I/R 5、10、20、30 min组：均为灌流液预灌注20 min，停止灌注30 min，再灌注时间分别为5、10、20、30 min;(7)PTX 100 μmol/L对照组;(8)PTX 100 μmol/L缺血组;(9)PTX 100 μmol/L I/R 5 min组;(10)PTX 100 μmol/L I/R 10 min组;(11)PTX 100 μmol/L I/R 20 min组： (12)PTX 100 μmol/L I/R 30 min组;治疗组灌注方法同I/R组，但在缺血前10 min及再灌注期持续给药至实验结束;记录各组血流动力学指标。 　　1.3 Langendorff灌流 乌拉坦(1g/kg) 腹腔麻醉，经舌下静注肝素5 mg/kg，分离心脏。将其立即放入KrebsHenseleit(KH) 缓冲液(120 mmol/L NaCl，4.8 mmol/L KCl，1.35 mmol/L CaCl2，1.2 mmol/L MgSO4，1.2 mmol/L KH2PO4,25 mmol/L NaHCO3，11 mmol/L 葡萄糖，pH7.4)。于液面下行主动脉插管，丝线结扎固定。将心脏接入Langendorff灌流装置上，用95% O2、5% CO2平衡的37℃ KH液行主动脉逆行恒压灌流，灌流压力为80 cmH2O，611刺激器 (Phipps amp; Bird，Richmond，USA)维持心脏博动300次/min。充水气球插入左心室并连接压力换能，左室舒张末期压(LVEDP)在实验开始调整为9～10 mmHg，通过BL420系统(成都泰盟)记录左心室发展压(LVDP)、LVEDP、左心室压上升最大速率(+dP/dt)及下降最大速率(-dP/dt)，并计算实验结束时恢复率(当前值/基础值)。 　　1.4 肿瘤坏死因子α(TNFα)含量检测 取心肌100 mg溶于1 ml磷酸盐缓冲液 (含1% Triton X100及蛋白酶抑制剂)中匀浆，4℃离心20 min，取上清-20℃保存。严格按照TNFα ELISA试剂盒说明书进行检测。 　　1.5 统计学分析 采用SPSS10.0软件，实验结果以x±s表示，两组间比较采用t检验;组内比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 　　2 结 果 　　2.1 PTX对心肌I/R损伤血流动力学的影响 见表1。缺血组和I/R 30 min组可以引起显著的心功能抑制。I/R 5 min后LVEDP明显升高，是缺血前的40倍;LVDP 明显降低缺血前的14倍。30 min再灌后LVDP显著降低了缺血前的10倍(Plt;0.01)，而LVEDP显著升高是缺血前的30倍(Plt;0.05);同时±dP/