抑制Dicer基因对乳腺癌细胞MCF-7周期和药物敏感性影响.pdf

中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 硕士研究生毕业(学位)论文 rotateminite 每min转数 rpm per SDS Sodium 十二烷基磺酸钠 dodecylsulphate See second 秒 siRNAshort RNA 短干扰核糖核酸 interfering TAE TriSaceticacidandEDTA 瞄s-乙酸．EDTA缓冲液 TBS．T trisbufferedsalineTween 吐温．Iris盐缓冲液 Tris 三羟甲基氨基甲烷 trishydroxymethylaminomethane U unit 单位(内切酶) 肛l mililiter 微升 V volt 伏特 h hour 小时 mln minute 分钟 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 硕士研究生毕业(学位)论文 性的影响 —J■I——■一 刚舌 达失调与多种肿瘤相关【1卅。乳腺癌是妇女发病率最高的恶性肿瘤，文献报道miRNA 最重要的酶之一，前体miRNA必须通过Dicer剪切才能成为成熟形式【5】，从而发挥 对靶基因翻译抑制的作用【6】。目前已经在前列腺癌【7]和肺癌【8】中发现了Dicer酶的 肿瘤生物学行为的改变。本实验通过合成带有荧光标记、特异性干扰Dicer基因的 siRNA序列，应用脂质体lipofectamine 的影响。希望通过对Dicer和miRNA的深入研究，有利于人们从新的角度理解肿瘤 的发生发展过程，为提高病人的生存率、改善治疗效果提供新的靶点和策略。 第一节实验材料与实验方法 一、实验材料 1、细胞系 人乳腺癌上皮MCF．7细胞(ATCCHTB22)由本实验室冻存。 2、细胞培养材料 MEM培养基(GibcoBRL) 胎牛血清(Hyclone) 胰蛋白酶(GibcoBRL) 二甲基亚砜(分析纯级)(北京益利化学品有限公司，北京) 15ml，50ml离心管，T-25cm2、T-75 cm2细胞培养瓶(costal公司) 3 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 硕士研究生毕业(学位)论文 6孔培养板(Coming公司) 3、抗体 Santa Cruz公司产品(SantaCruzInc．，SantaCruz，CA)。 Biotechnology 4、siRNA及相关试剂 上海吉玛公司合成(Genepharma Invitrogen公司产品。其余化学试剂均为市售分析纯产品。 5、总RNA提取材料 Trizol试剂(Invitrogen公司产品) 异丙醇(国产AR级