强肌健力饮对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用实验探究.docVIP

强肌健力饮对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用实验探究 　 作者：赵慧 荣向路 陈芝喜 陈津岩 李志强 何赞厚 【摘要】; 【目的】观察强肌健力饮对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用的影响。【方法】将SD大鼠随机分为正常对照组，肾阳虚模型组，强肌健力饮低、中、高剂量组(剂量分别为7.8、15.6、23.4g·kg-1·d-1)、右归丸组（剂量为5.8g·kg-1·d-1），除正常对照组外，均采用氢化可的松（剂量为25mg·kg-1·d-1）肌肉注射复制肾阳虚大鼠模型。观察动物的一般状态，计算下丘脑、睾丸指数并对睾丸做组织形态观察，采用放射免疫分析法检测血清睾酮（T）和雌二醇（E2）含量。【结果】强肌健力饮能显著降低下丘脑指数，升高肾阳虚模型大鼠血清T含量及降低E2/T比值（均P＜0.01），而E2含量无明显变化（P＞0.05）；组织形态学观察发现，强肌健力饮各剂量组睾丸曲精小管内精细胞体积明显大于肾阳虚模型组，精原细胞核染色质和初级精母细胞核染色体比较显著。【结论】强肌健力饮防治中医肾阳虚证的作用机制可能与其能调控性腺轴的水平有关。 【关键词】; 强肌健力饮/治疗作用； 重症肌无力/中药疗法； 肾阳虚证； 睾酮/血液； 雌二醇/血液； 疾病模型，动物； 大鼠 强肌健力饮是著名中医药专家邓铁涛教授治疗重症肌无力的经验方。邓老认为重症肌无力多属脾胃亏虚，筋脉失养之本虚证，至中后期，往往脾虚损及肾，而表现为脾肾阳虚，故脾虚、肾虚是致病之本，因而固护、调节先后天之本是治疗本病的关键。根据该方的临床主治特点，我们分别从脾虚证、肾阳虚证着手，对该方进行了一系列的实验研究［1-4］，初步证明强肌健力饮可促进脾虚小鼠核酸和蛋白质合成，改善肾阳虚证大鼠肾上腺轴的水平，但针对该方对肾阳虚证性腺轴的影响结果尚未报道。本实验观察了该方对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用的影响，现报道如下。 ; 1; 材料与方法 ; 1.1; 动物与分组; 清洁级SD大鼠，雄性，4月龄，体质量（200±20）g,由广东省医学实验动物中心提供，许可证号为粤监证字2006A015。大鼠在适应性喂养2d后，采用随机法将71只动物分为正常对照组10只，肾阳虚模型组13只，强肌健力饮低、中、高剂量组各12只，右归丸组12只。 ; 1.2; 药物及试剂; 强肌健力饮由黄芪、党参、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮、甘草等组成（均购自广州致信药业，经中药学院张丹雁老师鉴定），采用回流提取法，经过2次提取并收集挥发油，药液浓缩至3g/mL，4℃保存备用；右归丸购于北京同仁堂广州药业有限公司，批号6013022；氢化可的松注射液由扬州制药有限公司生产（批号；睾酮（T）、雌二醇（E2）放免试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供。 　　1.3; 造模［5-6］与给药; 肾阳虚模型组动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服蒸溜水2mL/d；正常对照组动物肌肉注射生理盐水1mL/d，同时灌服蒸馏水2mL/d；强肌健力饮低、中、高剂量组（即中药低、中、高剂量组，剂量分别为7.8、15.6、23.4g·kg-1·d-1）动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服相应剂量的强肌健力饮2mL/d；右归丸组动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服右归丸（剂量为5.8g·kg-1·d-1） 2mL/d，均连续14d。 ; 1.4; 主要观察指标; 造模灌药期间，每日观察动物的一般状态（包括饮食、毛发、精神、活动等）。于实验第15天（即最后1次给药16h后）眼球取血，离心，取上清液，-4℃保存待测；采用放射免疫分析法检测各组大鼠血清T、E2含量。然后处死大鼠，立即摘取下丘脑、睾丸称质量，计算各组脏器指数（w）:w=m脏器/mbody。睾丸放入体积分数10%福尔马林液内固定过夜，然后包埋、切片、苏木素—伊红（HE）染色处理，做组织形态学观察。 ; 1.5; 统计学方法; 采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。 ; 2; 结果 ; 2.1; 动物死亡原因; 实验过程中因灌胃操作失误及造模所用药物损伤等原因引起肾阳虚模型组大鼠死亡1只，中药高剂量组死亡3只，右归丸组死亡1只，最终进入结果分析为66只。 ; 2.2; 各组脏器指数比较; 表1结果显示，肾阳虚模型组大鼠下丘脑及睾丸指数与正常对照组比较均升高（P＜0.05或P＜0.01）；而中药低、中、高剂量组和右归丸组的下丘脑指数显著降低，与肾阳虚模型组比较差异有显著性意义（P＜0.01），睾丸指数无明显变化（P＞0.05）。 ; 2.3; 各组大鼠血清T、E2水平的比较; 表2结果显示，与正常对照组比较，肾阳虚模型组大鼠血清T含量显著下降，E2含量及E2/T比值显著