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日本乙型脑炎病毒prM-E蛋白N一糖基化的功能研究
目 录
摘墨耍……………………………………………………………………………………………………………………．．II
ABSTRACT………………………………………………………………………………………………………．．IV
第1章文献综述………………………………………………………………………．1
1．1日本乙型脑炎病毒的流行病学……………………………………………………1
1．2JEV的分子生物学研究进展……………………………………………………．．2
1．3病毒N．糖基化的研究进展………………………………………………………3
1．3．1蛋白糖基化是一种重要的生物学现象……………………………………3
1．3．2病毒蛋白的糖基化修饰具有重要的功能…………………………………4
1．3．3黄病毒中蛋白N．糖基化的功能…………………………………………．．4
第2章研究目的与意义………………………………………………………………7
第3章材料与方法……………………………………………………………………．8
3．1实验材料…………………………………………………………………………．．8
3．1．1毒株与细胞…………………………………………………………………．8
3．1．2菌种与质粒…………………………………………………………………8
3．1．4主要培养基………………………………………………………………．10
3．1．5本研究中所用的寡核苷酸引物…………………………………………．10
3．1．6缓冲液……………………………………………………………………．10
3．1．6．1
3．1．6．2Western
Blot缓冲液…………………………………………………ll
3．1．6．3
ELISA缓冲液………………………………………………………．11
3．1．6．4其它缓冲液…………………………………………………………．1l
3．2实验方法…………………………………………………………………………．11
3．2．1JEV病毒的增殖…………………………………………………………．．1l
3．2．2JEV基因组I矾A的提取…………………………………………………11
3．2．3RT-PCR扩增JEV 2
prME基因……………………………………………1
3．2．4
PCR产物的回收与纯化…………………………………………………．12
3．2．5
PCR产物的连接与转化…………………………………………………。12
3．2．6重组质粒的小提和酶切鉴定……………………………………………．13
3．2．7
PCR介导的定点突变和测序……………………………………………．13
3．2．8将基因及其突变基因连接到真核表达载体……………………………．14
3．2．9质粒的大量制备…………………………………………………………．．15
3．2．10质粒转染…………………………………………………………………．．16
3．2．11 6
WesternBlot…………………………………………………………………………………．．1
华中农业大学2011届硕士研究生学位论文
Endo
3．2．12 H和PNGase
F酶切试验……………………………………………17
3．2．13间接免疫荧光试验…………………………………………
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