紫外线对HaCaT细胞结合珠蛋白表达影响.docxVIP

Ｆｎｓｅｎｉ曲ｗｅｒｅｇｒｏｗｎｉｎ６－ｗｅｌｌｐｌａｔｅｓｔｏｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅｉｎＲＰＭＩ１６４０ｍｅｄｉｕｍ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１０％ｆｅｔａｌｃａｌｆ骶舢（ＦＣＳ），ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ（１００Ｉ＿ｔｇ／ｍＬ），ａｎｄｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（１００“ｇ／ｍＬ），ｕｎｄｅｒ５％Ｃ０２，ａｔ３ＴＣ．Ｗｈｅｎｔｈｅｃｅｌｌｓｈａｖｅｇｒｏｗｎｔｏｆｏｒｍａｍｏｎｏｌａｙｅｒ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｉｒｒａｄｉａｔｅｄｗｉｔｈ３６５ｎｍＵＶＡ８Ｊ／ｃｍ２，３１１ｎｍＵＶＢ８０ｍＪ／ｃｍｚ．２．ＩｍｍｕｎｏｅｙｔｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙＨａＣａＴｃｅｌｌｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄｅｖｅｒｙ６，２４ａｎｄ４８ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｉｒｒａｄｉａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｎｃｏｌｌｅｃｔｅｄｏｎｔｏｇｌａｓｓｓｌｉｄｅｓｂｙｃｙｔｏｓｐｉｎｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎａｔ１１００ｒｐｍｆｏｒ２ｍｉｎｕｔｅｓ．Ａｆｔｅｒｄｒｉｅｄｉｎ血ｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎａｃｅｔｏｎｅｆｏｒ１０ｍｉｎｕｔｅｓ．ＴｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎａＯ．３％Ｈ２０ｆｆＰＢＳｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒ３０ｍｉｎｕｔｅｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｑｕｅｎｃｈｅｎｄｏｇｅｎｅｏｎｓｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．ＡｍｏｕｓｅａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｈｕｍａｎＨｐ（Ｓｉｇｍａ），ｗａｓａｐｐｌｉｅｄａｓｔｈｅｆｉｒｓｔａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｉｎｃｕｂａｔｅｄａｔ３７＂Ｃｆｏｒ１ｈｏｕｒ．Ａｆｔｅｒｗａｓｈｅｓａｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ－ｌａｂｅｌｌｅｄｇｏａｔａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｍＯｌｌ∞ＩｇＧ（ｓｉｇｍａ），ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ．３－Ａｍｉｎｏ?９－Ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｚｏｌｅ（ＡＥＣ，Ｓｉｇｍａ）ＷａＳａｐｐｌｉｅｄａｓｃｏｌｏｒｉｎｇｓｕｂｓｔｒａｔｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＨｐｃａｎｂｅｆｏｕｎｄｉｎＨａＣａＴｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄａｌ６ｈａｎｄ４８ｈａｆｔｅｒｉｒｒａｄｉａｔｅｄｗｉｔｈ３６５ｎｍＵＶＡａｎｄ３１ｌｎｍＵＶＢ；ＨｐＣａｎｎｏｔｂｅｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｃｏｎ仕ａｓｔＨａＣａＴｃｅｌｌｓａｎｄＨａＣａＴｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄａｔ２４ｈａｆｔｅｒｉｒｒａｄｉａｔｅｄｗｉｔｈ３６５ｎｍＵＶＡａｎｄ３１ｌｎｍＵＶＢ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＢｏｔｈ３６５ｎｍＵＶＡａｎｄ３１ｌｎｍＵＶＢｃａｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＨｐｏｆＨａＣａＴｃｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｉｓｅｆｆｅｃｔｍａｙｂｅｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．Ｗｏｒｄｓ-8ＫｅｖＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ：ｈａｐｔｏｇｌｏｂｉｎ：ＨａＣａＴｃｅｌｌｓ；４?英文缩略语?５?论文?紫外线对ＨａＣａＴ细胞结合珠蛋白表达的影响前言在急性期反应过程中一些血浆蛋白特征性升高，统称为急性期蛋白（ａｃｕｔｅｐｈａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｐｐ）。结合珠蛋白（Ｈｐ）是Ａｐｐ的一种，炎症反应时其血浆水平升高２￣４倍‘心。ｒｉｐ是人类及其它哺乳动物体内主要的血红蛋白结合蛋白。通过与血红蛋白结合，｝Ｉｐ防止了溶血时铁离子的流失及肾脏的损伤‘３＇４】。Ｈｐ还具有抑制血红蛋白刺激的脂质过氧化反应的作用。据报道Ｈｐ在体内还具有重要的抗氧化功能【５】ｏＵｐ主要在肝脏合成，长期以来认为Ｈｐ在抑制炎症反应的过程中起重要作用。当机体受到感染、肿瘤、妊娠、损伤、急性冠状动脉梗塞等各种刺激或发生其它免疫反应时，其在血浆中的浓度增高。Ｘｉｅ掣６，７１发现新鲜获得的朗格汉斯细胞的胞浆中含有ｒｉｐ，并且可以抑制朗格汉斯细胞的功能成熟，表明Ｈ廿在抑制Ｔ细胞依赖的炎症性皮肤病中可能起到重要作用。李萍等‘８１观察到ＨｐｍＲＮＡ在正常皮肤表皮角质形成细胞中表达，以及Ｈｐ在部分皮肤病病理状态下的表达情况。姜红等‘９１发现ＵＶＡ、ＵＶＢ可上调ＨａＣａＴ细胞ＨｐｍＲＮＡ表达，随照射时间，ＨｐｍＲＮＡ表达呈时相变化。但紫外线照射ＨａＣａＴ细胞后Ｈｐ的蛋白水平表达情况尚无报道。本研究用免疫组化方法，定性探讨３６５ｎｍＵＶＡ、３１ＩｎｍＵＶＢ照射ＨａＣａＴ细胞后Ｕｐ的表达情况。实验材料一、ＨａＣａＴ细胞２０００年１０月由何春涤教授从德国ｔｈｅＦｒｅｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢｅｒｌｉｎ引进并冻存于液氮中。二、主要实验仪器１、Ｃ０２培养箱（美国ＱｕｅｕｅＳｙｓｔｅｍｓＴＭ２７１１型）２、水浴箱（河北黄骅航天仪器厂，ＴＤＷ－２００２型）６３、深低温冰箱（日本ＳＡＮＹＯ，ＵｌｔｒａＬｏｗ）４、蒸汽高压消毒箱（美国Ｔｕｔｔｎａｕｅｒ，２５４０ＭＫ）５、电热恒温培养箱（天津市泰斯特仪器公司，ＤＨ３６００Ａ型）６、细胞离心机（美国Ｓｈａｎｄ