利多卡因对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织层粘连蛋白及超微结构影响.docxVIP

ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＬｉｄｏｃａｉｎｅｇｉｖｅｎｂｅｆｏｒｅＬＰＳｃａｎｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅ１ｔｉｎｇｓｆｒｏｍＡＬＩｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｘｃｅｓｓｉｖｅｌａｍｉｎｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｌｕｎｇ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＬｉｄｏｃａｉｎｅ；Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ；Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ；Ｌａｍｉｎｉｎ；Ｌｕｎｇｕｌｔｒａ．ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ４?英文缩略语?５?论文?利多卡因对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织层粘连蛋白及超微结构的影响刖吾内毒素性急性肺损伤（ＡＬＩ）是临床常见的危重症，肺部炎症反应的特征性标志是多形核白细胞（ＰＭＮ）在肺内聚集和炎症反应。层粘连蛋白（Ｌｎ）在细胞与胶原基质粘附中起桥梁作用…，在肺组织损伤修复与血管重建中发挥重要作用。局麻药利多卡因（Ｌｉｄ）通过降低ＰＭＮ表面粘附能力，减轻ＰＭＮ在炎症部位聚集而具有抗炎特性ｆ２】。但是，利多卡困对急性肺损伤时层粘连蛋白表达的影响尚未见报道。我们通过复制内毒素肺损伤大鼠模型，研究内毒素肺损伤后肺组织中层粘连蛋白表达的变化及肺组织超微结构的改变，探讨不同剂量利多卡因对二者的影响及作用。实验材料与方法动物选择和分组健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３２只，体重２２０．２５０９（中国医科大学实验动物中心提供）。随机分为４组（ｎ－８）：Ａ组为生理黼水对照组；Ｂ组为脂多糖（ＬＰＳ）组；Ｃ组、Ｄ组分别为Ｌｉｄ２ｍｇ／ｋｇ组和Ｌｉｄ４ｍ∥ｋｇ组。动物模型及标本制备大鼠腹腔注射３％戊巴比妥钠２０ｍｇ／ｋｇ麻醉，建立尾静脉通路用于给药和输液。小剂量ＬＰＳ（ＬＰＳ，０５５：Ｂ５，Ｓｉｇｍａｒ公司，美国）２ｍｇ／ｋｇ微量注射泵输注，建立ＬＰＳ致急性肿损伤模型引。Ａ组：尾静脉输注生理盐水３ｍｌ：Ｂ组把脂多糖溶于ｌｍｌ生理盐水中，将２ｍｌ生理盐水及ｌｍｌ含ＬＰＳ液经尾静脉输入：Ｃ组、Ｄ组把Ｌｉｄ按２ｍｇ／ｋｇ，４ｍｇ／ｋｇ各溶于２ｍｌ生理盐水中，ＬＰＳ配置同Ｂ组，然后分别先输入含Ｌｉｄ液，再输入含ＬＰＳ液，以上各组速率均为０．０５ｍｌ／ｍｉｎ。６ｈ后将大鼠处死，迅速取右肺下叶肺组织置于４％多聚甲醛中固定，待行免疫组化分析；另取左肺上叶肺组织置于２．５％戊二醛溶液中固定，待行透射电镜观察肺６组织超微结构变化。肺组织层粘连蛋白表达的测定经４％多聚甲醛固定的肺组织标本石蜡包埋，后切片，厚度４９ｍ，常规脱蜡至水；热修复抗原（９０．１ｌＯ℃，ｌＯｍｉｎ）：滴加５％ＢＳＡ封闭液，室温２０ｍｉｎ；每张切片滴加５０ｐ．１一抗，３７＂（２孵育６０ｍｉｎ或４＂Ｃ过夜；每张切片滴加５０ｍ生物素化山羊抗小鼠ＩｇＧ，３７＂Ｃ孵育２０ｒａｉｎ：每张切片滴加５０／Ａ试剂ＳＡＢＣ，３７＂Ｃ孵育２０ｒａｉｎ；ＤＡＢ显色，镜下控制反应时间；苏木素轻度复染，脱水，透明封片，显微镜观察，以呈棕黄色者为阳性。每组各有一张ＰＢＳ液替代一抗，作为免疫组化的阴性对照。应用Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ／ＯｌｙｍｐｕｓＤＰｌ０／ＢＸ４１显微图像分析系统测定阳性产物光密度值。每只大鼠两张切片，每张切片随机选取５个视野，调节系统除去本底后，测定阳性产物的光密度值和积分光密度值，取平均值代表每只大鼠的阳性表达强度（阳性表达强度与积分光密度值的大小成正比）。肺组织常规透射电镜样品制备将２．５％戊二醛中固定的肺组织经１％饿酸固定，乙醇．丙酮系列梯度脱水后，Ｅｐｏｎ８１２浸透包埋，超薄切片，铀、铅双染色，ＪＥＭ．１２００ＥＸ透射电镜观察。统计学分析利用ＳＰＳＳｌ０．０统计软件分析，计量资料以均数士标准差瓦士ｓ）表示，组间比较采用单因素方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。实验结果各组层粘连蛋白变化Ａ组肺泡上皮细胞基底膜可见Ｌｎ弱阳性表达：Ｂ组较Ａ组表达明显增强Ｐ＜０．０１；利多卡因用药组肺组织中Ｌｎ表达与Ｂ组比较则不同程度降低，Ｃ组Ｐ＜０．０５，Ｄ组Ｐ＜０．０１：并且Ｃ组、Ｄ组比较也有明显差异Ｐ＜Ｏ．０５，见表ｌ。说明ＬＰＳ可明显增加肺组织中Ｌｎ含量，利多卡因可抑制其升高，并随剂量增大作用增强。７表ｌ，各组层粘连蛋白免疫蕴化结果比较（ｎ＝８，ｘ士ｓ）组别Ａ组Ｂ组Ｃ组Ｄ组与Ｂ组比较，＋Ｐ＜０．０１‘Ｐ＜０．０５与Ｃ组比较，“Ｐ＜０．０５层粘连蛋白６．３２士１．０３’３１．５９ａ：５．２４１８．７２士１．０６▲７．９２ａ：１．４２‘ｏ肺组织超微结构变化Ａ组肺组织超微结构基本正常，气血屏障清晰，基底膜均匀连续，厚度均一，ＩＩ型肺泡上皮清晰，表面微绒毛排列整齐，线粒体结构正常，板层小体数目结构基本Ｊ下常如图ｌａ、ｂ所示：图ｌａ，Ａ组电镜下肿组织的超微结构（ｘ５０００）８图ｌｂ，Ａ组电镜下肺组织超微结构（×５０００）Ｂ组肺组织超微结构明显受损，基底膜卷曲，厚度不均，断裂，局部增厚，呈多层状排列，ｌＩ型肺泡上皮细胞微绒毛稀疏，线粒体结构破坏，呈空泡状改变板层小体排空如图２