“复方黄芪附子汤”对慢性肾功能衰竭维持性血液透析患者氧化应激状态影响.docxVIP

延边大学临床医学院硕士学位论文第二章材料和方法１．材料１．１主要试剂超氧化物岐化酶（ｓ０Ｄ）（南京建成生物工程研究所）谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ—Ｐｘ）测试盒（南京建成生物工程研究所）过氧化氢酶（ｃＡＴ）测试盒（南京建成生物工程研究所）丙二醛（岫Ａ）测试盒（南京建成生物工程研究所）１．２实验仪器Ｆ６聚砜膜透析器（德国Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ公司）Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ４００８Ｂ血液透析机（德国Ｆｒｅｓ朗ｉｕｓ公司）Ｂ３１．３Ａ型聚甲基丙烯酸甲酯膜透析器（日本东丽株式会社）７２１紫外分光光度计（福建新大陆生物技术有限公司）ＢＳ６０型电热恒温水浴箱（北京医疗设备厂）ＬＤ４—２Ａ型高速离心机（北京医用离心厂）－８０℃冰箱（海尔）７６００型日立生化自动分析仪（日立高薪技术株式会社）虹Ｋ一８２２Ｋ型全自动血球分析仪（日本光电工业株式会社）１．３主要药物“复方黄芪附子汤”：黄芪、附子、茯苓、白术、白芍、桂枝、砂仁、陈皮、山药、生姜、甘草、生龙牡等。２．研究方法２．１研究对象和分组：选取大连大学附属中山医院体检中心的健康人２３例（Ｉ组）和该院血液净化中心的ＣＲＦ维持性血液透析患者４４例（慢性肾小球肾炎３５例、糖尿病肾病４例、慢性间质性肾炎３例、多囊肾２例）。根据透析器的类型分为洲Ａ膜透析器组（Ⅱ组）和ＰＳ膜透析器组（Ⅲ组）（各组间年龄、性别组成详见表１）。Ⅱ、Ⅲ组入选标准：（１）１８周岁以上；（２）维持性血液透析时间＞３个月；（３）２延边大学临床医学院硕士学位论文近３个月内无维生素ｃ和维生素Ｅ服用史；（４）自愿参加本次临床试验，并经过大连大学附属中山医院医学伦理委员会研究批准．２．２治疗方法：透析条件：均采用Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ４００８Ｂ血液透析透析机，碳酸氢盐透析液（Ｎａ＋：１４０ｍｍ０１／Ｌ，Ｋ．：２哪０１／Ｌ，Ｃｌ一：１１６咖０１／Ｌ，Ｃａ＝．；１．５咖０１／Ｌ，Ｍ９２．：０．５哪ｏｌ／Ｌ，ＨＣ０３。：３５咖ｏｌ／Ｌ，葡萄糖：Ｏ哪ｏｌ／Ｌ）。所有维持性血液透析患者均每周透析３次，每次４小时，血流量２００－２４０ｎｌｌ／ｍｉｎ，透析液速度５００ｍ１／ｍｉｎ，透析液温度为３６—３７℃。本实验中Ⅱ、Ⅲ组采用的透析器分别为日本东丽株式会社的Ｂ３１．３Ａ型透析器和德国Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ公司的Ｆ６型透析器，其透析膜有效表面积相等，尿素清除率（ｍ１／ｍｉｎ）分别为１８４和１８６。干体重标准：临床标准以没有水肿：体液容量下降到刚好不发生低血压，不发生透析后直立性低血压；胸片无心胸比例增大，肺野清晰：Ｂ超示无肝淤血及门静脉增宽为标准‘侧．?脱水方法：参照病人的干体重，设定脱水量，４小时内平均脱水。血管通路：动静脉内瘘穿刺４０例，颈内静脉血透长期双腔导管２例，锁骨下静脉血透长期双腔导管２例。?抗凝方式：Ⅱ、Ⅲ组均为全身普通肝素化抗凝，首次剂量为Ｏ．２一Ｏ．４Ⅲｇ／Ｊ（ｇ，追加剂量５—１０ＩⅡｇ／ｈ（每次透析时的肝素总用量详见表２）。２．３监测指标测定Ｉ组和Ⅱ、Ⅲ组透析前后的ＢＵＮ、Ｓｃｒ、Ｈｂ、ＨｃＴ、ｅ—ＳＯＤ、ｐ—ＳＯＤ、ｐ—肋Ａ、ｐ—ＧＳＨ—ＰＩ、ｐ—ＣＡＴ后，给予ＩＩ、Ⅲ组患者口服“复方黄芪附子汤”１００ｌｎｌ，日２次，６天后重新测量透析前后的上述各指标．透析充分性标准：用Ｋｔ／ｖ作为评价透析充分性的指标，按Ｄａｕｇｉｒｄａｓ公式计算，Ｋｔ／ｖ．一Ｉｎ（透前ＢｕＮ／透后ＢｕＮ－０．００８Ｔ—ｕＦ佃），Ｔ为透析时间（ｈ），ｕＦ为每次超滤量（Ｌ），ｗ为透析后体重（ｋｇ）。血压测量：患者取平卧位测量每次透析前、后的收缩压（ＳＢＰ）和舒张压（ＤＢＰ）并取平均值，如果患者出现不适，增加测量次数，均采用汞柱式血压计。血标本处理：Ｉ组晨起７时抽取空腹肝素抗凝肘静脉全血２ｍ１；Ⅱ、Ⅲ组在进行血透治疗前和血透治疗后各采取空腹肝素抗凝肘静脉全血３皿ｌ，以上血样本３延边大学临床医学院硕士学位论文两小时内在室温下以３０００×ｇ离心５ｍｉｎ后用移液器取上清，分装储存于一８０℃冰箱。２．３．１血清尿素氮、肌酐利用７６００型日立生化自动分析仪测量：Ｈｂ、ＨｃＴ利用ＭＥＫ一８２２Ｋ型全自动血球分析仪测量。２．３．２卜ＳｏＤ的测定试剂的配制：（１）将试剂一加热蒸馏水稀释至１００ｍ１。（２）将试剂四与其稀释液按照１：１４的比例稀释，４℃保存。（３）将试剂五中的粉剂加入７５ｍ１的７０—８０℃的蒸馏水，配好后４℃避光保存。（４）将试剂六中的粉剂加７５ｍｌ的蒸馏水，配好后４℃避光保存．‘（５）显色剂的配制：按照试剂五：试剂六：冰乙酸＝３：３：２的体积比配成显色剂，４℃避光保存。操作步骤：根据实验需要取清洁试管若干，分别加入ｌ号试剂１ｍｌ，其中２管设为对照管，余为测定管上在测定管中分别加入血清３０ｕｌ，对照管中加入蒸馏水３０ｕ１上依次在测定管和对照管中分别加入试剂二、试剂三、试剂四各１００ｕｌ上用漩涡