鉴定 cyclic di-GMP 效应蛋白：高通量筛选策略与实验.PDFVIP

1376 生 物 工 程 学 报 程寿廷 等/鉴定cyclic di-GMP 效应蛋白：高通量筛选策略与实验验证方法 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn September 25, 2017, 33(9): 1376−1389 DOI: 10.13345/j.cjb.170175 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与新方法· cyclic di-GMP 1,2 1 1 程寿廷 ，王芳芳 ，钱韦 1 100101 2 100101 , , . cyclic di-GMP . , 2017, 33(9): 1376–1389. Cheng ST, Wang FF, Qian W. Identification of cyclic di-GMP protein receptors: high-throughput screening strategies and experimental verification. Chin J Biotech, 2017, 33(9): 1376–1389. 摘 要: 环二鸟苷单磷酸 (cyclic di-GMP 或c-di-GMP) 是细菌细胞中广泛存在的第二信使，调控细菌生物被膜 发育、致病力、运动性、胞外多糖产生及细胞周期在内的诸多重要生理表型。c-di-GMP 通过结合多种类型的 效应子 ( 包括核糖开关或效应蛋白) 来发挥调控功能。由于 c-di-GMP 分子在构象上具有多变性，其结合的效 应子同样具有多样性。新型效应蛋白的筛选、鉴定是当前细菌信号转导领域的研究热点和难点，也是解析 c-di-GMP 调控机制的首要环节。本文在阐述c-di-GMP 结合不同类型的效应蛋白并调控细菌生物被膜发育的基 础上，综述了目前筛选 c-di-GMP 效应蛋白的方法，包括遗传筛选、亲和色谱结合质谱鉴定、DRaCALA 系统 鉴定以及基于分子对接的预测等。同时，对验证c-di-GMP 效应蛋白的技术，如等温微量热滴定、表面等离子 共振、微量热泳动在内的多种验证方法进行了总结，对比了这些策略和方法在应用上的优、缺点，为在细菌及 其真核宿主基因组水平鉴定c-di-GMP 效应蛋白的研究提供参考。 : 环二鸟苷酸单磷酸，二鸟苷酸环化酶，磷酸二酯酶，效应蛋白，生物被膜 Received: April 28, 2017; Accepted: June 12, 2017 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos.. Corresponding author: Wei Qian. Tel: +86-10 E-mail: qianw@ (Nos. 2017-06-26 /kcms/detail/11.1998.Q1455.005.html 程寿廷 等/鉴定cyclic di-GMP 效应蛋白：高通量筛选策略与实验验证方法 1377 Identification of cyclic di-GMP protein receptors: high-throughput s