维生素A对大鼠实验性肺气肿肺泡壁细胞增殖与凋亡的影响.pdfVIP

一 一 一 垂 匾一 一缩一 英文缩写 英文全称 中文全称 ·5· 一 +|I 一一 一 一 ． + ／●＼ |．| ． +| + + 、；．／ 一 一 一论一 一 一文一 维生素A对大鼠实验性肺气肿肺泡壁 细胞增殖与凋亡的影响 日U 吾 肺气肿是以终末细支气管远端的气腔扩大，肺泡壁破坏为特征的疾病， obstructive 是慢性阻塞性肺疾病(chronic disease，COPD)的主要 pulmonary 肺实质病理改变之一。肺气肿的病理改变通常被认为是一种不可逆的，但 Massaro等人¨1的研究改变了这个观点，他们证实维A酸能诱导实验性肺 气肿的肺泡再生，对受损肺泡进行修复，使肺气肿在形态学上得到改善。这 使维A酸在防治肺气肿方面的作用受到了人们关注。随着相关研究的深 入，人们发现类维生素A(以维生素A和维A酸为代表)在肺泡结构分化、 肺泡功能维持以及损伤后修复中起着重要的作用，在防治COPD的药物治 疗中很有前景。近年来肺泡壁细胞凋亡在肺气肿形成中的作用逐渐受到重 视，肺泡壁细胞的凋亡与肺气肿的形成密切相关，肺气肿的肺泡壁细胞存在 着凋亡增加，肺泡壁细胞增殖与凋亡的失衡可能是肺气肿形成的又一重要 机制¨’3．4J。本研究旨在通过观察维生素A对大鼠肺气肿模型的干预作用 及肺泡壁细胞增殖和凋亡的影响，探讨维生素A防治实验性肺气肿的作用 及机制。 材料与方法 一、实验动物与分组 体重(180．4-20)g，采用随机数字表法分为2组：预防组和治疗组，各组再随 机分为3个亚组，对照亚组、模型亚组和维生素A亚组。每个亚组各8只大 鼠。预防组中维生素A亚组给予维生素A(沈阳巴斯夫维生素有限公司) 10万u／kg／日灌胃，其他两个亚组给予等量油剂，在给药4周后，对模型亚 组、维生素A亚组采用弹性蛋白酶(沈阳生化制药厂)气管内滴入的方法 ．6． (2000u／Kg)复制肺气肿模型，对照亚组气管内滴入等量生理盐水。治疗组 中模型亚组、维生素A亚组用弹性蛋白酶气管内滴人法复制肺气肿模型， 对照亚组气管内滴入等量生理盐水，术后第五周起进行药物干预，维生素A 亚组给予维生素A(10万u／kg／日)灌胃，其他两个亚组给予等量油剂。于 实验的第8周结束时处死全部大鼠。 二、病理标本制备、免疫组织化学染色及TUNEL检测 处死大鼠后，取出肺组织，以10％中性甲醛固定肺脏72小时。每只鼠 取右肺下叶最大横径处肺组织常规石蜡包埋切片，分别行HE染色；增殖细 cellnuclear 胞核抗原(proliferating 博士德公司PCNA试剂盒)，按说明书进行染色，胞核棕褐色颗粒状为阳性。 TUNEL法测定凋亡情况(罗氏公司TUNEL试剂盒)，具体步骤按说明进行，、 胞核呈棕黄色为阳性。 三、形态学定量分析 Morth Universal 应用Meta SystemV4．6软件(US Imagingcompa— Imager ny)进行分析(中国医科大学实验技术中心提供)。测定平均肺泡数(mean alveoli alveoli number，MAN)和平均肺泡面积(meanarea，MAA)。 四、增殖指数和凋亡指数测定 index，PI)：手工计数每张切片中的正常蓝染的 增殖指数(proliferation 细胞核的数量N