从RNA提取到qRT-PCR.pdf

去芜存菁，返本还源 —从RNA提取到qRT-PCR 北京全式金生物技术有限北京全式金生物技术有限公司司 核酸模板制备核酸模板制备 RT酶的概述 RT实验策略 qPCR实验概述 qPCR实验设计 数据分析 核酸模板制备 高品质的高品质的RNA模板是后续实验成功的模板是后续实验成功的前提前提 • 材料保存 • RNA提取与检验 • 基因组基因组DNADNA残留残留 材料保存材料保存 • 有条件的情况下应立刻提取或液氮速冻 • 原因原因 ：内源内源RNase污染污染——RNase来自溶酶体来自溶酶体 细胞死亡，溶酶体破裂释放，导致RNA降解 • 尽快处理材料，液氮保护 • 不方便使用液氮的情况下：专门的材料保存试剂 e.g. RNAhRNAholdld (T(TransGGen)) RNAhold • 原理原理 ：：主要成分为非特异性蛋白变性剂主要成分为非特异性蛋白变性剂 • 可快速渗透组织，变性抑制RN