单精子卵细胞桨注射对胚胎质量地影响.pdfVIP

山西医科大学 *在职硕士学位论文* 材料和方法 一．研究对象 常规IVF—ET并培养3d新鲜胚胎移植82个周期(周期是指患者从促超 排卵到完成胚胎移植的完整过程，一例患者可做多个周期)。除外1例5d 囊胚移植，1例3d培养因卵巢过度刺激综合症未移植外，IcsI组：40个周 期；IVF组：40个周期进行分析，女方年龄22—46岁，平均31．32岁；不育 年限l一16年，平均4．38年；原发不孕53周期，继发不孕27个周期。其 中2例为第二次IVF，1例为第三次IvF。单纯女方因素38例，单纯男方 因素29例。男女双方因素13例。IVF的临床指征包括输卵管因素、盆腔 结核、顽固性多囊卵巢综合症、子宫内膜异位症及垂体功能异常。ICsI指 征包括男性少精、弱精及输精管梗阻性无精，前一次IvF失败和不明原因 者。 二．研究方法 1．药品、试荆与设备 (1)药品 促性腺激素释放激素激动剂(GnRH—a DipherelIne) 卵泡刺激素(FsHGona卜F) 人绒毛膜促性腺激素(HCG) 黄体酮双异丙芬 (2)试剂 磷酸盐缓冲液(PBs)、体外受精胚胎移植培养基(HTF)、卵裂液(G1) ——6—— 山西医科大学 *在职硕士学位论文* 聚烯吡酮(PvP)、透明质酸酶、矿物油、肝素纳、梯度离心液(90％percoll： percoll：90％percoll6．7ml+HTF3．3m1)o (3)设备 超净工作台、c02培养箱、离心机、倒置显微镜(0LYMPUS)、单精子 二只、男科普通显微镜，PL20x物镜。负压泵、冰箱、37℃水浴箱、阴道超 声设备、Makler精子记数盘、培养皿、四孔培养皿、普通吸管、巴氏吸管、恒 温试管架及恒温平板、加样器、圆底试管、圆锥形试管、无菌离心管、实验 室常用注射器、手套等一次性耗材。30度IcsI穿刺针、30度IcsI固定 针、取卵针、胚胎移植管、避孕套(无菌，无滑石粉)、过滤器。 2．促超排卵方案 采用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH—a Diphereline)进行自然周 期抑制，卵泡刺激素(FSH Gona卜F)募集并促卵泡生成，人绒毛膜促性腺 激素(HCG)刺激排卵的长方案及短方案：(1)长方案：月经规律者，月经第 月经复潮后第三天开始注射FsH，平均300Iu／日，隔日监测卵泡直径及 后36小时采卵。月经不规律者，月经第3天开始口服避孕药，服药14天 避孕药7天后停药，出现撒药性阴道出血后第三天开始注射FSH，其余同 一—— 山西医科大学 *在职硕士学位论文* 制。月经第五天开始注射FsH平均300IU／日，监测及注射HCG、采卵步 导下阴道后穹隆穿刺，负压在108—110mmHg采卵，卵子直接吸入37℃ PBs+肝素试管中。 3．IvF实验室操作 (1)实验室准备： 取卵前一日检查超净台、显微仪、c02培养箱、显微操作仪、恒温试管 架和恒温平板。下午将HTF．Gl及矿物油若干毫升(取决于预期取卵数) 置于37℃C02培养箱平衡。35mm培养皿加HTF用于冲洗卵子，四孔培 养皿中加入HTF，其上覆盖矿物油滴用于卵子培养及受精。将PBs+肝 及注射器及各种一次性耗材。 (2)精子获取： 前期检查能够体外射精并且精液中有活精子，此次精液经手淫法取 得，精液流入无菌精液杯中。患者应在禁欲3—5天后取精。精子取出后 立刻送往实验室，液化30分钟后，正常精子用梯度离心法进行精液洗涤， 利用精液中活力不同的精子浮力密度不同，在离心力作用下，各自停留在 不同密度的percoIl溶液中，使其达到分离的目的。取各浓度梯度离心液 1．5ml自离心管底由浓至稀。小心加入形成不连续密度梯度柱。将液化后 的精液加入等量的HTF混匀，加到密度梯度柱上1500转离心