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叶绿体色素的提取分离理化性质鉴定及含量测定
叶绿体色素的提取、分离、理
化性质鉴定及含量测定
实验目的：分析校园中两种植物
材料叶绿体色素的差异
内容：
①叶绿素a和b含量差异；
②绿色素与黄色素的含量差异
色素提取分离的原理;
叶绿素测定的方法及其原理；
绿色素与黄色素的纯化原理及步骤；
叶绿素的理化性质的鉴定方法
实验原理
Photosynthesis
Thermosynechococcus
elongatus(蓝细菌)
PS I PS II
光合色素的脂溶性 酒精、丙酮等有机溶剂提取
Chl是双羧酸的酯皂化反应 叶绿素与类胡萝卜素
分离
Chl 的取代反应：卟啉环中的Mg2+ 可被H2+ 、Cu2+ 、
Zn 2+取代
光学特性：
• Chla Chlb有两个强吸收峰含量测定时选择叶绿素
特有的红光吸收峰波长；
第二单线
-12
态10 S
能 热
第一单线 分子内能量传
-9 递
态10 S
传向反应中
收 吸 收 吸 6 心
8
0
4 6 n能 热
3 7 m
能 0 0光 荧
n n
量 光 m 光 m 三线态 光 磷 能 热
-3 -2
10 ~10 S
基态
Chl的荧光和磷光现象反射光中
能观察到呈红色的荧光；
叶绿素化学性质不稳定，光容易受
强光的破坏
叶绿体色素的分离方法
• 纸层析方法：根据色素在不同有机溶剂中的
溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同
，可将它们彼此分离开。 （定性，小量）
（今天选择做）
• 皂化反应和萃取分离方法
（大量，定量）
叶绿素a和b含量的测定方法—分光光度法
• 根据Lambert-Beer定律 ：
OD =C ·k +C ·k （1）
1 a a1 b b1
OD =C ·k +C ·k （2 ）
2 a a2 b b2
C =12.7 OD -2.69 OD （3 ）
a 663 645
C =22.9 OD -4.68 OD （4 ）
b 645 663
C = C + C =8.02 OD +20.21 OD （5）
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