九高效液相色谱.ppt

高效液相色谱法与经典液相色谱法比较 经典液相色谱法，流动相在常压下输送，分析周期长。 而高效液相色谱法流动相改为高压输送（最高输送压力可达3.5?107Pa）; 色谱柱是用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱； 柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。 所以称它为高压、高速、高效液相色谱法。 药物分析研究方法 以我国分析试验室杂志中的药物分析综述统计分析见表 高效液相色谱法与其他分离方法的比较 HPLC主要分离类型与原理 一、 液-固吸附色谱 二、 液-液分配色谱 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C18柱（反相柱）。 (4) 检测器 b. 荧光检测器（Fluorescence detector） 第三节 液相色谱的固定相与流动相 （2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量低； （3）化学键合固定相 将固定液机械地涂渍在担体上组成固定相。尽管选用的流动相与固定液不互溶，但在色谱过程中固定液仍会有微量溶解。 以及流动相经过色谱柱的机械冲击，固定相会不断流失。 70年代初发展了一种新型的固定相—化学键合固定相。 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 液相色谱实验所需的基本参数 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量 以上参数即构成一个具体的HPLC方法；亦称色谱条件 综上所述，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。 这种固定相是通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶（载体）表面的游离羟基上，代替机械涂渍的液体固定相。 这避免了固定液流失，改善了固定相的功能，提高了分离的选择性，适用于分离几乎所有类型的化合物。 固定相类型 极性固定相：正相色谱 以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等键合在硅胶表面制成的 非极性固定相：反相色谱 是C18、C8和苯基键合相的填料， 反相色谱是当今液相色谱的最主要分离模式。 使用条件 为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8）。 太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。 化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性。 1.非极性固定相 C18（简称ODS） 、C8 2.极性流动相 水 3.极性调节剂??? 甲醇、乙腈、四氢呋喃 4.分离非极性和极性较弱化合物 占整个HPLC应用的80%左右 5.组分流出顺序 极性大先流出 1.极性固定相 聚乙二醇、氨基与腈基键合相 2.相对非极性流动相 正已烷、环已烷 3.极性调节剂??? 乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷 4.分离中极性和强极性化合物? ??酚类、胺类、羰基类及氨基酸类 5.组分流出顺序 极性小先流出 反相色谱法 正相色谱法 液液分配色谱 2.液-固吸附固定相 种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等； 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm； 二、液相色谱的流动相 1. 流动相特性 流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况 2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 常用溶剂： 己烷、四氯化碳