江苏省新沂市高中生物 第四章 生物化学与分子生物学技术实践 4.1 蛋白质的分离与纯化方法教案（选修1）.docVIP

蛋白质的分离与纯化方法 教学目标： 1、知识与技能： 掌握蛋白质的分离与纯化方法， 知道从生物材料中提取芳香油 2、过程与方法： 掌握蛋白质的分离与纯化三种方法的比较过程 3、情感态度价值观： 培养学生科学实验的观点。 教学重点： 蛋白质的分离与纯化 教学难点： 蛋白质的分离与纯化， 从生物材料中提取芳香油 教学方法： 自主、合作、探究学习。 教具使用： 无 共案部分 个案部分 教学过程 教师主导活动 学生主体活动 课前： 布置学习目标和预习提纲，要求学生完成预习任务，下发及收缴批改导学案（附导学案） 学生进行预习，完成导学案。 课中： 对上节课存在问题进行点拨。 新授： 根据学生自学情况，引导学生分析主要的问题。强调以下几点。 【思维点拨】 1．说明用透析法、离心沉降法和电泳等方法纯化蛋白质的原理和大致过程。 2．影响电泳泳动速度的主要因素有哪些?这些因素是如何影响泳动速度的? 3．“血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳”实验最关键的一步是什么?你能说出这一步的操作要求吗? 4．漂洗后的薄膜上可以看到几条色带?分别代表什么? 5．植物芳香油提取的常用方法有哪些?这些方法的原理各是什么? 【疑难解析 】 1．蛋白质的分离纯化： ①根据蛋白质溶解度不同的分离方法——蛋白 质的盐析： 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO：一和NH})有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失永”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。 ②根据蛋白质分子大小的差别的分离方法——透析： 透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。 ③根据蛋白质带电性质进行分离——电泳法： 各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同从而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。 2．实验原理： 醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在pH为8．6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、 γ一球蛋白5条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。 布置学生课堂检测，并重点提示。 学生对上节存在问题进行讨论。 学生自学基础知识。 学生根据导学案内容讨论并展示个人、小组成果。 思考： 蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法： 抽提方法： 纯化主要是根据： 常用的方法： 醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤： 色带： 学生完成课堂检测 课后： 布置课外作业及下一节预习提纲。（见导学案） 学生完成课外作业及下一节预习。 板书设计 生物成分的分离与测定技术 蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法： 抽提方法： 纯化主要是根据： 常用的方法： 醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤： 色带： 教学札记 三、其他补充教学资料（各位教师根据各班教学特点选择补充资料，可另附纸） 高二生物生物成分的分离与测定技术导学案 使用时间： 编制人： 一、学习目标： 知道蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法，蛋白质抽提方法，掌握蛋白质的分离与纯化方法。 二、知识构成： 1．蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法有： 根据蛋白质的不同特性，分别可选择哪些抽提方法？ 、 、 蛋白质的纯化主要是根据 之间以及 之间在 、