生化分离工程期末考试.doc

第一章 绪论 1、生物分离工程：从发酵液或酶反应液或动植物培养液中分离、纯化生物产品的过程。 2、生化分离工程的特点：①目标产物浓度低、杂质含量高；②物料体系复杂——多相，非牛顿流体；③目标产物稳定性差；④分离过程可变性；⑤质量要求高⑥产品价格与产物浓度呈反比 第二章 发酵液的预处理和固液分离 1、预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率。 2、预处理的方法：凝聚和絮凝、加热法、调节悬浮液的PH值、杂蛋白的去处、高价无机离子的去除、助滤剂和反应剂 。 3、凝聚：指在投加的化学物质作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１mm 大小块状凝聚体的过程。机理：1）中和粒子表面电荷 ；2）消除双电层结构；3）破坏水化膜。 4、絮凝：指使用絮凝剂将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。机理：架桥作用。采用絮凝法可形成粗大的絮凝体，使发酵液较易分离。 5、絮凝的影响因素：1.发酵液的性质；2.絮凝剂的浓度，最佳用量为粒子表面积约有一半被聚合物覆盖；3.絮凝剂的分子量；4.pH 控制；5.搅拌速度。 6、混凝：对于带负电荷的菌体或蛋白质来说，采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理，单独使用可达到较好絮凝效果；对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果。这种包括凝聚和絮凝机理的过程，称为混凝。 7、杂蛋白的去除方法：沉淀法（等电点沉淀法、酸碱调节）、变性法（蛋白质从有规则的排列变成不规则结构的过程称为变性）、吸附法（加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去）。 8、固液分离的方法：过滤、离心、膜分离、双水相萃取、扩张床吸附。 9、影响发酵液固液分离的因素：1）发酵液中悬浮离子的大小；2）发酵液的黏度（固液分离速度通常与粘度成反比，粘度越大，固液分离越困难。） 10、过滤:借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。 11、离心技术分类：(1)按分离因子Fr分类：①常速离心机（Fr 3,000 ）；②中速离心机（Fr = 3,000 — 5,0000）；③高速离心机（Fr≥5,0000 ）；④超速离心机（Fr = 20,000 — 2,000,000）。 (2)按用途分类：①分析性（超速离心机）；②制备性（实验室用、工业用）。 (3)工业应用分类：①管式离心机；②多室式离心机；③碟式离心机；④螺旋卸料沉降离心机；⑤离心过滤 12、离心沉降原理：在重力场中，当一固体微粒通过无限连续介质时，它的运动速度受两种力的影响：一是微粒受到因微粒和流体介质间密度不同而产生的作用力Fg；二是微粒所受到的流体阻力作用Ff。 13、离心机的种类按速度和离心力： 1)常速离心机 ：用于细胞、菌体和培养基残渣等分离； 2)高速（冷冻）离心机：用于细胞碎片、较大细胞器、大分子沉淀物等分离； 3)超速离心机：用于DNA、RNA蛋白质、细胞器、病毒分离纯化；检测纯度；沉降系数和相对分子量测定等。 14、超速离心的离心方法：差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心。 第三章 细胞破碎与分离 1、细胞破碎技术:利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内物质包括目的产物成分释放出来的技术。 2、细胞破碎方法及其原理 ①机械破碎：通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。 ②物理破碎：通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。 ③化学破碎：通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎。 ④酶促破碎：通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎。 3、选择破碎方法的依据：1.细胞处理量； 2.细胞壁强度和结构；3.目标产物对破碎条件的敏感性；4.碎程度；5.目标产物的选择性释放。 4、包涵体：一种蛋白质不溶性聚集体，包括目标蛋白、菌体蛋白等。目标蛋白一级结构是正确的，但立体结构是错误的，所以没有生物活性。 5、高表达产生的积聚物在细胞内部形成不溶物原因？ 答：①蛋白过量积聚，超过溶解度，导致沉淀②蛋白生成太快，分子间疏水基团相互作用而聚集沉淀③蛋白生成太快，分子内部二硫键的错误连接导致沉淀④表达蛋白过多，与其结合/诱导组分不足，不能形成溶解状态⑤蛋白质自身不稳定。 6、基因工程包涵体的纯化方法：收集菌体细胞 → 细胞破碎 →包涵体的洗涤→目标蛋白的变性溶解 →目标蛋白的复性。 7、包涵体获得几种常见的工艺路线 (一)：机械破碎→ 离心提取包含体 → 加变性剂溶解 → 除变性剂复性 特点:是利用了包含体与细胞碎片的密度差，用离心法将包含体与细胞碎片和可溶性蛋白质分开，获得了干净的包含体，再对包含体溶解复性。优点：摆