自噬参与巨核细胞成熟与前血小板释放的初步研究（Preliminary study of autophagy involved in maturation of megakaryocytes and release of platelets）.pdfVIP

自噬参与巨核细胞成熟与前血小板释放的初步研究 中文摘要 中文摘要 巨核细胞是血小板的前体细胞，该细胞的成熟需要经过多次核内有丝分裂 （Endomitosis ）。核内有丝分裂是一种特殊的细胞分裂方式，巨核细胞通过 DNA 复制但不进行细胞分裂来增大细胞胞浆的体积及增加染色体数目。巨核细胞的成 熟为前血小板形成及骨髓血窦中血小板的释放积累了丰富的物质基础如 RNA ，蛋 白质，致密性颗粒等。自噬（Autophagy ）是真核细胞通过溶酶体途径降解及回收 细胞内长寿命蛋白质或细胞器的过程。自噬在维持造血干细胞的干性及造血微环 境中起到重要的作用，并且有少数文献报道自噬的异常会干扰髓系祖细胞增殖及 分化，然而自噬与巨核细胞发育的相关性尚不清楚。本实验在于探讨自噬作用与 巨核细胞系细胞分化及血小板发育之间的关系。 我们选用了巨核系白血病细胞 Dami 进行体外培养。实验用自噬激活剂雷帕霉 素刺激 Dami 细胞检测巨核系细胞分化的标志性蛋白 CD41 的变化；用 PMA 刺激 Dami 细胞体外模拟巨核细胞的核内有丝分裂，利用 Western blot 检测自噬相关蛋 白及利用流式细胞仪的技术检测细胞的核型变化；最后利用自噬抑制剂 Bafilomycin A1 阻断自噬小体的形成并检测其对Dami 细胞核内有丝分裂的影响。 结果表明： (1)通过雷帕霉素刺激可以提高 Dami 细胞内的自噬水平，同时可以显著 （P0.001 ）促进CD41 的表达，表明自噬水平的提高会促进巨核系细胞的分化； (2)通过 PMA 刺激 Dami 细胞进行体外模拟巨核细胞的核内有丝分裂，发现核 内有丝分裂伴随着二型自噬相关蛋白 LC3 的增加，表明细胞染色体的积累可能与 自噬相关； (3) 自噬的抑制剂Bafilomycin A1 能阻断自噬溶酶体的形成，造成二型 LC3 蛋 白的积累，本实验发现Bafilomycin A1 的加入可以阻止PMA 刺激的 Dami 细胞的 核内有丝分裂，同时伴随着细胞的凋亡； (4)建立了原代巨核细胞体外培养和实时观察成熟巨核细胞释放前血小板和血 小板的方法学； (5)初步观察了成熟巨核细胞释放前血小板和血小板基本过程，并发现 LC3II I   中文摘要 自噬参与巨核细胞成熟与前血小板释放的初步研究 表达于该过程的不同形态的细胞中。 综上所述，雷帕霉素引起的自噬能促进巨核细胞系Dami 细胞的分化并且PMA 刺激的 Dami 细胞的核内有丝分裂与自噬水平提高相关。原代巨核细胞分化为成熟 巨核细胞、释放前血小板、以及血小板的生成过程均有自噬相关蛋白表达。为进 一步探讨巨核细胞核内有丝分裂与自噬的关系，以及血小板发育的调控，提供了 研究基础。 关键词：巨核细胞系白血病细胞 自噬 核内有丝分裂 多倍体 作 者：王琦 指导教师：朱力 II   自噬参与巨核细胞成熟与前血小板释放的初步研究 英文摘要 Studies on the role of autophagy in megakaryocyte maturation and proplatelet release Abstract