表面展示工程在酒精发酵方面的应用#39;.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（８）：１０７１１０ 表面展示工程在酒精发酵方面的应用 李小冬　杨　娜　万永虎　吴　嘉　贾东晨　乔　敏 （云南大学微生物资源可持续利用教育部重点实验室 云南省生物资源保护与利用重点实验室 省部共建国家重点实验室培育基地　昆明　６５００９１） 摘要　目前，表面展示工程作为一种新型的极具应用潜力的技术手段，在组合文库的筛选、蛋白 质工程、燃料乙醇的生产和生物修复等技术中已经扮演了极其重要的角色。介绍了表面展示工程在 酒精发酵方面的应用，重点阐述酒精发酵过程中酶类展示原理和全细胞催化的应用前景。 关键词　表面展示　酒精发酵　 燃料乙醇　发酵　全细胞催化 中图分类号　Ｑ８１９ 　　表面展示工程自从 １９８５首次报道以来，很多新颖 酶的催化反应。目前主要是酵母和噬菌体被用作融合 的展示系统被相继开发出来，如酵母、细菌和病毒展示 蛋白的展示，另外一些革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 ［１］ ［１，５６］ 系统 。表面展示工程是将外源蛋白以融合蛋白的形 也被引用于一些具有功能蛋白质的展示构建之中 式展示在微生物或者细胞器表面，并使其保持相对独 如图１。 立的空间构象和原有的生物活性，从遗传学的角度实 现了菌种改造，许多科学家在多肽、文库筛选和功能蛋 ［２］ 白表达方面都进行了大量的研究 。另外表面展示工 ［３］ 程实现了全细胞催化 的可能，从而在多酶系催化一 步法活体发酵方面提供了一个优质的技术平台，为酒 精发酵过程中的多种酶协同催化反应技术瓶颈问题提 供了出路。本文主要阐述了表面展示技术在酒精发酵 中酶系展示的研究现状，详述了酿酒酵母的两大展示 系统（Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓｙｓｔｅｍ和Ｆｌｏｃｃｕｌｉｎｓｙｓｔｅｍ）在共展示淀 图１　酵母表面展示技术展示的功能 粉酶和纤维素酶方面的应用，讨论了其催化优势和潜 蛋白质种类及其应用 在应用价值。 Ｆｉｇ．１　Ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙｏｆｙｅａｓｔｓｂｙｔｈｅｄｉｓｐｌａｙｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ １　生物催化 　　酵母作为目前最重要的展示宿主，具有凝集素系 　　表面展示工程是一种通过分子改造的、可以进行 全细胞催化的技术，它是在活体的基础上来固定蛋白 统 （Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓｙｓｔｅｍ）和 絮 凝 素 系 统 （Ｆｌｏｃｃｕｌｉｎ ［７］ ［３］ ｓｙｓｔｅｍ） 。由酿酒酵母的不同交配型ａ和 ，组成了 质或者多肽 。这些通过改造的酵母或者其他微生物 α ［４］ ａａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ和 ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ两种类型，前者由ＡＧＡ１和 被修饰之后被称为“ＡｒｍｉｎｇＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ” ，它们在 α ＡＧＡ２编码，后者由ＡＧ１编码。通过 ａａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ展示 表面进行底物的催化而不需要进入细胞内部。宿主的 α 细胞壁和质膜能够帮助细胞维持其正常形态，而且帮 的蛋白质主要是通过目的蛋白的 Ｃｔｅｒｍｉｎａｌ和亚基 助