异丙酚或缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤期细胞凋亡及Bcl2Bax蛋白表达的影响.pdfVIP

·492· 中囤约物与I临床2009年6月第9卷第6期ChineseRemediesClinics，June2009。V01．9，No．6 ·基础研究· 异丙酚或缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤期 细胞凋亡及Bcl一2／Bax蛋白表达的影响 余淑珍荆建敏郭永清张玮玮 ischemia 血前进行5min缺血及5rain再灌注。连续3次。P组肝门夹 肝缺血再灌注损伤(hepaticreperfusioninjury． rain股静脉给负荷剂量的异丙酚5．0 HIRI)在休克、肝脏手术以及肝脏移植术中是一个重要的临闭前15 m#kg，继之以 床问题，可直接影响到疾病的预后、手术成功率和患者的存 30mg·kg--·h-t的速率持续输注。 活率。近年来研究表明．细胞凋亡与缺血再灌注损伤密切相 关，而且可能在HIRI的病理过程中起着霞要作用…。Bcl一2和织．用10％中性甲醛液固定，常规石蜡包埋、切片，经常规二 Bax是细胞凋亡调控的重要基因。二者的表达水平影响细胞 甲苯脱蜡及梯度乙醇脱水后，采用二步免疫组织化学法(PV 的转归。异丙酚是临床常用的静脉麻醉药，近年来越来越多 的研究表明其对缺血再灌注损伤有一定的保护作用。但其能 达在肝细胞的胞质。经显色剂二氨基联苯胺(DAB)显色呈棕 否通过影响细胞凋亡从而减轻肝损伤尚待进一步探讨。本研 黄色。显微镜下观察，每张切片随机选取5个视野，利用 究建立大鼠肝脏缺血再灌注模型．拟通过肝脏缺血再灌注期 Bcl一2／Bax蛋白表达的变化及细胞凋亡率来探讨异丙酚、缺血分析阳性区域平均吸光度值(A)，以A值大小代表阳性产物 预处理对HIRI时细胞凋亡的影响及机制。 表达的多少。 1材料与方法 1．2．3原位细胞凋亡检测：用TUNEL法行肝组织切片细胞凋 1．1材料 亡的原位检测。肝组织切片制作方法同上，在末端脱氧核苷酸 1．1．1实验动物：成年健康SD大鼠72只．体质量250～300 g，由山西医科大学实验动物中心提供。 后形成的3-OH末端。借助生物素与亲和素的特异结合，使过 氧化物酶连接至DNA断点，最后加入底物，通过DAB显色， 1．1．2主要试剂：Bax兔抗单克隆抗体(P-19。8C一526)和Bcl一2 兔抗多克隆抗体(N一19，sc-492)(SantaCruz公司，美国)、二可在光镜下观察到细胞核棕黄着色的凋亡细胞。每例标本的 步法免疫组织化学检测试剂(PV一6001，北京中杉金桥生物技切片随机选取5个400倍视野。计算出平均每100个细胞中 的凋亡细胞数，并以百分数表示作为凋亡指数(AI)。 术有限公司)、原位细胞凋亡检测(TUNEL)试剂(Roche公司， 德国)。 1．2．4肝组织病理形态学观察：肝组织切片制作方法同上，苏 木素一伊红(HE)染色光镜观察。切取新鲜左叶肝组织约l i．1．3主要药物：异丙酚注射液(AstraZeneca公司，意大利)。 1．2方法 mm3．用2．5％戊二醛周定，l％锇酸后同定，梯度乙醇脱水后环 1．2．1动物分组及动物模型制备：实验动物随机分为4组：假 司．日本)下观察超微结构改变。 手术组(Sham组)、缺血再灌注组(1R组)、异丙酚组(P组)、缺 1．3统计学处理 血预处理组(IP组)．每组18只。每组又按再灌注时间(1、3、6 h)分为3个时相，每个时相6只。