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miRNA在农作物研究中的应用进展 　　摘要 miRNAs是内源的小分子RNA，在生物体生长发育、生物体代谢途径以及抵抗生物或非生物胁迫中起着非常重要的作用。综述了miRNA在水稻、玉米、油菜、棉花等主要农作物生长发育的调控的应用研究进展，最后探讨了miRNA未来研究热点，并对其在农作物研究中的应用前景进行了展望。 　　关键词 miRNA；农作物；应用；研究进展 　　中图分类号 S5；Q522 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）21-0014-03 　　miRNAs（microRNA）在生物体生长发育、生物体代谢途径以及抵抗生物或非生物胁迫中起着非常重要的作用[1-2]。miRNA是内源的小分子RNA，约占整个真核生物基因组基因总数的2%，能通过RNase Ⅲ的Dicer酶和/或α蛋白家族的精确剪切，产生具有反向重复的转录物[3]。植物miRNA通过与 RNA诱导沉默复合体（RISC）结合，切割靶mRNA，介导靶DNA甲基化抑制靶mRNA的翻译或来调控基因的表达[4-5]，在植物生长素信号、叶片发育、花器官形成等生命活动、细胞内基因表达调控及植物响应干旱、低温等逆境生理过程中发挥重要的调控作用[6-8]。 　　研究植物中miRNA功能的方法有如下几种：一是生化与分子生物学方法测定miRNA指导下mRNA的剪切反应的精确位点，该方法可将miRNA与其调控的生化反应联系在一起[4-5]；二是导入抗miRNA的靶基因，使原本被miRNA抑制的基因得到表达，植物的表型变化就可反映出miRNA的功能；三是通过上调miRNA的表达，然后从表型的变化分析miRNA的功能。综述了该技术在农作物研究中的应用，以期为农业科研研究提供参考。 　　1 在主要农作物研究中的应用 　　水稻、玉米、油菜、小麦等作为重要的粮食作物，miRNA在这些作物中生长发育起着重要的作用。 　　1.1 在水稻研究中的应用 　　水稻是全球第二大粮食作物，miRNA的发现补充了研究人员对水稻基因调控机制的理解。 　　1.1.1 水稻生长发育的调控。Zhu Q等[9-11]研究表明，植物miRNA通?^与靶基因的序列互补造成靶基因的降解或翻译的阻断，从而实现对内源基因的负调控。在miRNA代谢途径中，核酸酶Dicer和PPD家族蛋白Argonaute对于miRNA的合成发挥作用。 　　1.1.2 根的发育。在植物中，Meng Y等[12]对miRNA介导的生长素信号途径进行了深入研究，如miR164、miR160等通过生长素应答因子（ARF）影响植物不定根的发生、侧根的发育及根冠的形成。Meng Y等[12]研究证明，水稻中存在着miR390-TAS3-ARF2/ARF3/ARF4和miR167-ARF6/8-CH3通路来调控根的发育。此外，Bian H等[13-14]发现过表达 miR393导致靶基因AFB2（Auxin signaling F-BOX）和TIR1（transport inhibitor response 1）的表达水平下调，出现了水稻根冠和主根增长的表型。 　　1.1.3 花的发育。Yamaguchi等[15]研究表明，AP2（Apetala2）基因调控花序分生组织向花分生组织的转变，参与花器官的形态发育。Peng等[16]研究发现了miRNA在雄配子体发育过程中的作用机制，并证明miR167和miR160能够切割5种生长素应答因子ARF，这些ARF在花粉母细胞发育到二孢花粉粒的过程中高度表达。Zhu Q等[9]研究发现，miR172可以调控AP2基因，控制水稻花的发育。 　　1.1.4 幼穗的发育。Peng H等[16-17]研究发现，过表达OsSPL14的转基因水稻在生殖期促进幼穗的分支，并提高水稻产量，而 miRNA156不能切割突变后的OsSPL14，突变水稻从而表现出产量提高、抗倒伏等性状。Tong H等[18-19]研究表明，miRNA397通过下调编码漆酶蛋白的OsLAC基因的表达。 　　1.1.5 分蘖。过表达miR393的转基因水稻中出现分蘖数增加，同时水稻分蘖抑制因子OsTB1、生长素转运因子OsAUX1 以及生长素受体因子（TIR1和AFB）表达水平均下调。据此推测，miR393的过表达可能通过抑制生长素转运因子和生长素受体因子的表达，抑制了腋芽处分蘖抑制因子OsTB1的表达，最终引起分蘖的增加[10]。 　　1.1.6 种子发育。Lu S等[9，19]研究表明，在水稻种子发育相关的调控网络中，miRNA通过控制营养物质的合成和运输发挥重要的作用。 　　1.1.7 胚的发育。Bian H等[13，16]研究培养水稻愈伤组织时发现，miR156、miR397等miRNA在愈伤组织中表