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第二章 天然药物化学成分 提取分离方法与技术（5） Extraction and isolation technology 二、结构测定中常用波谱法简介 第三节 天然药物化学成分的结构测定 (三)、核磁共振谱 碳谱(13C-NMR) 碳谱提供的结构信息是分子中不同类型和化学环境的碳核的化学位移、13C-1H之间的异核偶合常数等。 13C的化学位移 13C的化学位移也取决其周围的化学环境及磁环境，并可据此可判断C的类型。13C的化学位移一般位于0～220。 ①饱和碳（sp3）的δ一般位于0～100，其中与饱和碳相连如C-CH3 ,C-CH2位于0～50，若与氧相连如O-CH3 ,O-CH2, O-CH则位于50～100；若与氮相连如N-CH3 ,N-CH2, N-CH则位于40～80。 二、结构测定中常用波谱法简介 第三节 天然药物化学成分的结构测定 (三)、核磁共振谱 碳谱(13C-NMR) 13C的化学位移 ②苯环和双键碳（sp2）的δ一般位于100～160，其中CH2=CH2上的碳无取代时位于123，苯环上的碳无取代时位于128。当苯环上有氧取代时，与氧相连的碳一般位于145～160，而该碳邻位和对位上的碳则移向高场，位于110左右。 ③炔碳（sp）的δ一般位于60～100。 ④羰基碳的δ一般位于160～220。对于O=C-OCH3, O=C-OH, O=C-O-,O=C-N,其中羰基碳一般位于170左右；若羰基与C=C或苯环共轭，则羰基碳位于180～190附近；醛羰基碳一般在200左右，酮羰基碳一般在200以上。 * * 第三节 天然药物化学成分的结构测定 主要内容 测定程序 结构测定中常用波谱法简介 紫外吸收光谱 红外吸收光谱 核磁共振谱 质谱 一、测定程序 第三节 天然药物化学成分的结构测定 (一)化合物的纯度确定 在进行结构测定前必须进行纯度鉴定，样品的纯度是获得准确信息的重要保证。纯度的检查可通过样品的晶形、熔点、溶程、比旋度、色泽等物理常数进行判断，如果是液体化合物需要测其沸点、比重、折光率及比旋度等。纯的化合物外观和形态较为均一，通常有明确的熔点，熔程一般应小于2℃。 实际研究中，更多的是采用薄层色谱或纸色谱方法。使用这两种色谱方法进行测定时，一般要求至少选择在三种溶剂系统中展开，并要求样品呈单一斑点，方可判断其为纯化合物。必要时，需采用高效液相色谱加以确认。 一、测定程序 第三节 天然药物化学成分的结构测定 (二)分子式的测定 确定一个化合物的分子式时，经典的方法是先进行元素定性分析，再测定各元素在化合物中所占的百分含量，从而求出化合物的实验式。并依据测出的相对分子质量，计算出该化合物的分子式。此法样品用量较大，准确性差。 目前，最常用、最精确的是质谱法（MS），高分辨质谱（HR-MS）不仅可给出化合物精确的分子量，还可直接给出分子式。 还可利用同位素丰度比法求算。其原理是通常组成有机化合物的主要元素(氟，磷、碘除外)均由相对丰度比一定的同位素所组成，且重元素一般比轻元素重1～2个质量单位。故由重元素组成的分子将比由轻元素组成的分子重1一2个质量单位。据此。在大多数有机化合物的MS图上，如能见到稳定的分子离子峰[M]+.时，则在高出其1～2个质荷比(m/z)处还可同时见到[M+1]+.及[M+2]+.两个同位素蜂;对一定的化合物来说，其[M]+.、[M+1]+.及[M+2]+.峰的相对强度应为一定值(含Cl、Br时除外),据此，可算出化合物的分子式。具体方法参见有关文献。同位素丰度比法对分子量在500以下、又能生成稳定分了离子的化合物来说常优先选用。 一、测定程序 第三节 天然药物化学成分的结构测定 (三)结构测定 化合物的分子式被确定之后，就需要推定官能团和分子骨架。一般先计算化合物的不饱和度，准确计算出结构中含有的双键数或环数，并结合所测的物理常数、化学定性试验、化学降解等反应，以及所测UV,RI,NMR和MI等波谱数据，综合分析，以确定化合物含哪些官能团，具何种母核，属于哪类化合物。 不饱和度计算 不饱和度(u或Ω)，表示分子中存在的双健或环的数目，是解析化合物的一个重要参教。计算不饱和度的方法如下: 1、化合物官能团和分子骨架的推定 计算不饱和度的方法如下: 一、测定程序 第三节 天然药物化学成分的结构测定 结合文献调研，综合分析谱学数据及官能团定性、定量分析结果以及与已知化合物进行比较或化学沟通(化学降解、衍生物制备或人工合成)以确定其平面结构；通过测定CD谱、ORD谱、NOE谱或2D-NMR及进行X射线衍射分析以确定